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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

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[求助] 十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙已有15人参与

虫子我做DNA电泳接近4年了，从来没失过手，大家可能会想这是一个很简单的实验，怎么会有问题呢？我也是这么想的。所以我师妹出了问题后，我以为很简单就能解决，谁料我亲自上阵，搞了好久问题依旧。真是一世英名毁于这个入门实验手上，晚节不保啊！这不想起了小木虫，特来求助。

言归正传：问题：见图片，不管怎么跑，MARKER都是这个鬼样子，一开始还只有低于500BP的marker出现这样的情况，后面越来越严重，所有的都这样了。

那么问题很简单，我当然不会简单的就来求助，我尝试过哪些解决办法呢？

一，换电泳Buffer。对师妹不放心，亲自配置新鲜的Buffer，问题依旧。
二，新买Marker。这换了Buffer没用，难道Mraker太久了，出问题了？买了俩支新Mraker，一支takara的，一支fermentas的。问题依旧。
三，新买琼脂糖。没办法，怀疑琼脂糖有问题，新买了一瓶BIOWEST的琼脂糖。问题依旧。
四，新买染料。我们实验室用的是Biotum的gelred，买了大概有大半年了，怀疑染料出了问题，买一支新的。问题依旧。
五，换电泳仪。难道电泳仪老化，电压不稳？换另一个一直在跑蛋白偶尔也跑跑中性PAGE的电泳仪（一直正常运行）。问题依旧。

神啊，都换得差不多了，还是老样子，这可如何是好？难道是我加热的姿势不对？微波炉加热和电磁炉加热会有区别吗？明天试试。

20140825.jpg

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1楼 2014-08-26 21:02:18

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君扬1989

铁杆木虫 (著名写手)

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怎么感觉像是加了酶，被切成了几段似的呢？拖尾很严重，浓度过高？还是琼脂糖浓度不适合？

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2楼2014-08-26 21:14:21

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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

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阿修罗Axuro(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:05:55
阿修罗Axuro: 金币+25, ★★★很有帮助, 已经解决，虽然不是Marker量的问题，但是从这里入手解决的。 2014-08-28 16:06:21

用了多少DNA跑的胶？用量太大了。每孔用100 ng左右就差不多了（取决于你孔的大小）。
我的感觉是严重超量所致，不是其他什么大问题。

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3楼2014-08-26 23:26:46

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