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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

[求助] 十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙 已有15人参与

虫子我做DNA电泳接近4年了，从来没失过手，大家可能会想这是一个很简单的实验，怎么会有问题呢？我也是这么想的。所以我师妹出了问题后，我以为很简单就能解决，谁料我亲自上阵，搞了好久问题依旧。真是一世英名毁于这个入门实验手上，晚节不保啊！这不想起了小木虫，特来求助。

言归正传：问题：见图片，不管怎么跑，MARKER都是这个鬼样子，一开始还只有低于500BP的marker出现这样的情况，后面越来越严重，所有的都这样了。

那么问题很简单，我当然不会简单的就来求助，我尝试过哪些解决办法呢？

    一，换电泳Buffer。对师妹不放心，亲自配置新鲜的Buffer，问题依旧。
    二，新买Marker。 这换了Buffer没用，难道Mraker太久了，出问题了？买了俩支新Mraker，一支takara的，一支fermentas的。问题依旧。
    三，新买琼脂糖。 没办法，怀疑琼脂糖有问题，新买了一瓶BIOWEST的琼脂糖。问题依旧。
    四，新买染料。 我们实验室用的是Biotum的gelred，买了大概有大半年了，怀疑染料出了问题，买一支新的。问题依旧。
    五，换电泳仪。 难道电泳仪老化，电压不稳？换另一个一直在跑蛋白偶尔也跑跑中性PAGE的电泳仪（一直正常运行）。问题依旧。
   
神啊，都换得差不多了，还是老样子，这可如何是好？  难道是我加热的姿势不对？微波炉加热和电磁炉加热会有区别吗？明天试试。

十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙
20140825.jpg
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1楼 2014-08-26 21:02:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

君扬1989

铁杆木虫 (著名写手)
怎么感觉像是加了酶，被切成了几段似的呢？拖尾很严重，浓度过高？还是琼脂糖浓度不适合？
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2楼2014-08-26 21:14:21
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普通回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿修罗Axuro(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:05:55
阿修罗Axuro: 金币+25, ★★★很有帮助, 已经解决，虽然不是Marker量的问题，但是从这里入手解决的。 2014-08-28 16:06:21
用了多少DNA跑的胶？用量太大了。每孔用100 ng左右就差不多了（取决于你孔的大小）。
我的感觉是严重超量所致，不是其他什么大问题。
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3楼2014-08-26 23:26:46
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yypyy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉像是胶没溶好，以前我也偶尔遇见过这种情况～

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-08-26 23:30:22
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朽木~~

新虫 (初入文坛)
果断制胶的问题，
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5楼2014-08-27 01:25:05
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douglaspei

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿修罗Axuro(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:06:12
阿修罗Axuro: 金币+5, ★有帮助, 谢谢热心帮助 2014-08-28 16:07:03
从电泳图看像是上样量过高。如果降低上样量仍不能解决问题，建议调整电泳条件（电流＜80A）。如果仍不行，建议检查一下电泳槽的铂金丝。祝好运！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-08-27 07:20:34
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-26 23:26:46
用了多少DNA跑的胶？用量太大了。每孔用100 ng左右就差不多了（取决于你孔的大小）。
我的感觉是严重超量所致，不是其他什么大问题。

请注意看完我的问题，我的问题是Marker是模糊的，不是DNA条带问题。Marker我一般加5ul。
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7楼2014-08-27 08:48:53
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yypyy at 2014-08-26 23:30:22
感觉像是胶没溶好，以前我也偶尔遇见过这种情况～

我怀疑过胶没熔好，然后我试过各种熔，熔很久都试过，而且我做胶四年了，从来没遇到过这个问题，不至于以前都能熔好，忽然就熔不好了。
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8楼2014-08-27 08:49:55
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by douglaspei at 2014-08-27 07:20:34
从电泳图看像是上样量过高。如果降低上样量仍不能解决问题，建议调整电泳条件（电流＜80A）。如果仍不行，建议检查一下电泳槽的铂金丝。祝好运！

请注意我提的问题，我提出的问题不是关于DNA条带的，而是关于Marker的。我试过降低电压，无效。铂金丝看了，外观上没有明显发现，电泳时铂金丝上也一样的冒气泡，没有发现不正常现象。铂金丝有问题的话，要么不通电，要么就是通电低，能有什么问题呢？
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9楼2014-08-27 08:52:05
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 朽木~~ at 2014-08-27 01:25:05
果断制胶的问题，

请讲述原因，我做胶是0.2g 琼脂糖加20ml TAEbuffer，于微波炉中加热至沸腾，然后拿出来，摇匀，再加热至沸腾，再摇匀，再加热至沸腾再摇。就是沸腾3次。而且4年来我都如此做，从未有这个问题。一开始师妹按我的做，也没有任何问题，后来才出来问题的。
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10楼2014-08-27 08:54:22
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