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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-26 19:48:53
请注意看完我的问题，我的问题是Marker是模糊的，不是DNA条带问题。Marker我一般加5ul。...

都是一样的问题，信不信由你。
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11楼2014-08-27 08:54:43
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 君扬1989 at 2014-08-26 21:14:21
怎么感觉像是加了酶，被切成了几段似的呢？拖尾很严重，浓度过高？还是琼脂糖浓度不适合？

请注意问题，问题是marker，问的不是DNA条带。
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12楼2014-08-27 08:55:06
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miclebibi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是胶的问题，建议你用新的TAE
另外沸腾三次不必要吧，我都是微波三分钟，但是既然你做了四年没事那也无所谓
建议你自己从头到尾做一次，让师妹看着
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13楼2014-08-27 09:17:05
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得问题出在师妹配的缓冲液上

[ 发自小木虫客户端 ]
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14楼2014-08-27 09:18:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
应该果断换人
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15楼2014-08-27 09:24:54
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-27 08:54:22
请讲述原因，我做胶是0.2g 琼脂糖加20ml TAEbuffer，于微波炉中加热至沸腾，然后拿出来，摇匀，再加热至沸腾，再摇匀，再加热至沸腾再摇。就是沸腾3次。而且4年来我都如此做，从未有这个问题。一开始师妹按我的做， ...

你用TBE试试，用啥TAE啊。。。。。跟制胶应该没关系。
TAE通常用来做10kbp以上的条带比较好，通常能分清楚超螺旋与否。

从其他条带的情况来看，你高BP的条带普遍是浆糊一样。而且拖带看起来也不太像是降解。

引物二聚体这么多，引物浓度没摸好哇，或者设计的不太好。
用GELRED，记得胶要冷一点再加，否则效果很差的。

从条带1,2高BP的拖尾情况，推测你的初始电压有点高了。降低电压试试，另外缓冲液浓度用0.5的，对不对？确认下。制胶也要用TBE制哦，别用水。。。。估计你不会犯这个错误的。。。TAE如果要用，配置过程防止冰醋酸的挥发哦。。。

推荐换TBE试试，其实10k的条带我用TBE效果也觉得非常好，可以适当的提高一点点浓度，我用的0.8的
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16楼2014-08-27 10:48:30
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匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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17楼2014-08-27 11:09:07
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杨仔

铁虫 (初入文坛)
哥们，你好像只能换师妹了
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18楼2014-08-27 12:10:28
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小豆子J

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
既然自己能换的都换了还是问题依旧，找个跑胶正常的实验室，把你的策略再来一遍，我想问题就会发现了。
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19楼2014-08-27 13:38:52
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
阿修罗Axuro(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:10:24
楼主，我看了你的论述，我觉得是你的TAE有问题，我们实验室也出现过类似的问题，把TAE重新配置就可以了，你可以试试
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任重道远……
20楼2014-08-27 13:54:57
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