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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-26 19:48:53
请注意看完我的问题,我的问题是Marker是模糊的,不是DNA条带问题。Marker我一般加5ul。...

都是一样的问题,信不信由你。
11楼2014-08-27 08:54:43
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 君扬1989 at 2014-08-26 21:14:21
怎么感觉像是加了酶,被切成了几段似的呢?拖尾很严重,浓度过高?还是琼脂糖浓度不适合?

请注意问题,问题是marker,问的不是DNA条带。
12楼2014-08-27 08:55:06
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miclebibi

银虫 (小有名气)

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应该是胶的问题,建议你用新的TAE
另外沸腾三次不必要吧,我都是微波三分钟,但是既然你做了四年没事那也无所谓
建议你自己从头到尾做一次,让师妹看着
13楼2014-08-27 09:17:05
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我觉得问题出在师妹配的缓冲液上

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2014-08-27 09:18:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

应该果断换人
15楼2014-08-27 09:24:54
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

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10楼: Originally posted by 阿修罗Axuro at 2014-08-27 08:54:22
请讲述原因,我做胶是0.2g 琼脂糖加20ml TAEbuffer,于微波炉中加热至沸腾,然后拿出来,摇匀,再加热至沸腾,再摇匀,再加热至沸腾再摇。就是沸腾3次。而且4年来我都如此做,从未有这个问题。一开始师妹按我的做, ...

你用TBE试试,用啥TAE啊。。。。。跟制胶应该没关系。
TAE通常用来做10kbp以上的条带比较好,通常能分清楚超螺旋与否。

从其他条带的情况来看,你高BP的条带普遍是浆糊一样。而且拖带看起来也不太像是降解。

引物二聚体这么多,引物浓度没摸好哇,或者设计的不太好。
用GELRED,记得胶要冷一点再加,否则效果很差的。

从条带1,2高BP的拖尾情况,推测你的初始电压有点高了。降低电压试试,另外缓冲液浓度用0.5的,对不对?确认下。制胶也要用TBE制哦,别用水。。。。估计你不会犯这个错误的。。。TAE如果要用,配置过程防止冰醋酸的挥发哦。。。

推荐换TBE试试,其实10k的条带我用TBE效果也觉得非常好,可以适当的提高一点点浓度,我用的0.8的
16楼2014-08-27 10:48:30
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匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT

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17楼2014-08-27 11:09:07
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杨仔

铁虫 (初入文坛)

哥们,你好像只能换师妹了
18楼2014-08-27 12:10:28
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小豆子J

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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既然自己能换的都换了还是问题依旧,找个跑胶正常的实验室,把你的策略再来一遍,我想问题就会发现了。
19楼2014-08-27 13:38:52
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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阿修罗Axuro(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:10:24
楼主,我看了你的论述,我觉得是你的TAE有问题,我们实验室也出现过类似的问题,把TAE重新配置就可以了,你可以试试
任重道远……
20楼2014-08-27 13:54:57
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