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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

[求助] 十分诡异的电泳问题,困扰太久了,求各位帮忙 已有15人参与

虫子我做DNA电泳接近4年了,从来没失过手,大家可能会想这是一个很简单的实验,怎么会有问题呢?我也是这么想的。所以我师妹出了问题后,我以为很简单就能解决,谁料我亲自上阵,搞了好久问题依旧。真是一世英名毁于这个入门实验手上,晚节不保啊!这不想起了小木虫,特来求助。

言归正传:问题:见图片,不管怎么跑,MARKER都是这个鬼样子,一开始还只有低于500BP的marker出现这样的情况,后面越来越严重,所有的都这样了。

那么问题很简单,我当然不会简单的就来求助,我尝试过哪些解决办法呢?

    一,换电泳Buffer。对师妹不放心,亲自配置新鲜的Buffer,问题依旧。
    二,新买Marker。 这换了Buffer没用,难道Mraker太久了,出问题了?买了俩支新Mraker,一支takara的,一支fermentas的。问题依旧。
    三,新买琼脂糖。 没办法,怀疑琼脂糖有问题,新买了一瓶BIOWEST的琼脂糖。问题依旧。
    四,新买染料。 我们实验室用的是Biotum的gelred,买了大概有大半年了,怀疑染料出了问题,买一支新的。问题依旧。
    五,换电泳仪。 难道电泳仪老化,电压不稳?换另一个一直在跑蛋白偶尔也跑跑中性PAGE的电泳仪(一直正常运行)。问题依旧。
   
神啊,都换得差不多了,还是老样子,这可如何是好?  难道是我加热的姿势不对?微波炉加热和电磁炉加热会有区别吗?明天试试。

十分诡异的电泳问题,困扰太久了,求各位帮忙
20140825.jpg
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-26 23:26:46
用了多少DNA跑的胶?用量太大了。每孔用100 ng左右就差不多了(取决于你孔的大小)。
我的感觉是严重超量所致,不是其他什么大问题。

请注意看完我的问题,我的问题是Marker是模糊的,不是DNA条带问题。Marker我一般加5ul。
7楼2014-08-27 08:48:53
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君扬1989

铁杆木虫 (著名写手)

怎么感觉像是加了酶,被切成了几段似的呢?拖尾很严重,浓度过高?还是琼脂糖浓度不适合?
2楼2014-08-26 21:14:21
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
阿修罗Axuro(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 19:05:55
阿修罗Axuro: 金币+25, ★★★很有帮助, 已经解决,虽然不是Marker量的问题,但是从这里入手解决的。 2014-08-28 16:06:21
用了多少DNA跑的胶?用量太大了。每孔用100 ng左右就差不多了(取决于你孔的大小)。
我的感觉是严重超量所致,不是其他什么大问题。
3楼2014-08-26 23:26:46
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yypyy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉像是胶没溶好,以前我也偶尔遇见过这种情况~

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-08-26 23:30:22
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