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阿修罗Axuro金虫 (小有名气)
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[求助]
十分诡异的电泳问题，困扰太久了，求各位帮忙 已有15人参与
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虫子我做DNA电泳接近4年了，从来没失过手，大家可能会想这是一个很简单的实验，怎么会有问题呢？我也是这么想的。所以我师妹出了问题后，我以为很简单就能解决，谁料我亲自上阵，搞了好久问题依旧。真是一世英名毁于这个入门实验手上，晚节不保啊！这不想起了小木虫，特来求助。 言归正传：问题：见图片，不管怎么跑，MARKER都是这个鬼样子，一开始还只有低于500BP的marker出现这样的情况，后面越来越严重，所有的都这样了。 那么问题很简单，我当然不会简单的就来求助，我尝试过哪些解决办法呢？ 一，换电泳Buffer。对师妹不放心，亲自配置新鲜的Buffer，问题依旧。 二，新买Marker。 这换了Buffer没用，难道Mraker太久了，出问题了？买了俩支新Mraker，一支takara的，一支fermentas的。问题依旧。 三，新买琼脂糖。 没办法，怀疑琼脂糖有问题，新买了一瓶BIOWEST的琼脂糖。问题依旧。 四，新买染料。 我们实验室用的是Biotum的gelred，买了大概有大半年了，怀疑染料出了问题，买一支新的。问题依旧。 五，换电泳仪。 难道电泳仪老化，电压不稳？换另一个一直在跑蛋白偶尔也跑跑中性PAGE的电泳仪（一直正常运行）。问题依旧。 神啊，都换得差不多了，还是老样子，这可如何是好？ 难道是我加热的姿势不对？微波炉加热和电磁炉加热会有区别吗？明天试试。  20140825.jpg |
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snoopytbw
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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你用TBE试试，用啥TAE啊。。。。。跟制胶应该没关系。 TAE通常用来做10kbp以上的条带比较好，通常能分清楚超螺旋与否。 从其他条带的情况来看，你高BP的条带普遍是浆糊一样。而且拖带看起来也不太像是降解。 引物二聚体这么多，引物浓度没摸好哇，或者设计的不太好。 用GELRED，记得胶要冷一点再加，否则效果很差的。 从条带1,2高BP的拖尾情况，推测你的初始电压有点高了。降低电压试试，另外缓冲液浓度用0.5的，对不对？确认下。制胶也要用TBE制哦，别用水。。。。估计你不会犯这个错误的。。。TAE如果要用，配置过程防止冰醋酸的挥发哦。。。 推荐换TBE试试，其实10k的条带我用TBE效果也觉得非常好，可以适当的提高一点点浓度，我用的0.8的 |
16楼2014-08-27 10:48:30
君扬1989
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2楼2014-08-26 21:14:21
ssssllllnnnn 
至尊木虫 (知名作家)
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3楼2014-08-26 23:26:46
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