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lmxlxj

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于培养基和内生菌分离 的问题

最近一直在研究一篇关于“甲醇利用型产生吡咯喹啉醌PQQ的内生菌分离的文章”，有个问题真是不懂。在网上也查不到好的方法，求高手解答一下



内生细菌被成功分离后，先用2种培养基进行培养：
     
   完全培养基：蛋白胨 10 g，NaCl 5 g，H2O 1000 mL，pH 7.0[68]。
     基本培养基：（NH4）2HPO4 3 g，K2HPO4 2 g，NaCl 1 g，烟酸 20 μg，VBl 10 μg，VB2 20 μg，泛酸钙 20 μg，吡哆醇 20 g，生物素10 μg，对氨基苯甲酸10 μg，MgSO4·7H2O，0.2 g，FeS04·7H2O 10 mg，H2O 1000 mL，MnSO4·H2O 5 mg[68]

“PQQ 产生菌的初筛
将供试菌株接种于装有10 mL 1%无水甲醇的基本培养基和1%无水甲醇的完全培养基的 50 mL 发酵管中，28℃、180 r/min 摇床培养 7 d，观察菌体生长情况，选择发酵液颜色由清澈变为红色的菌株。”


这一步就是初步鉴定此菌可以产出PQQ，但是为什么要用两个培养基呢？一个不就已经够了？？他所说的变成红色，应该是两个培养液都能变成红色的才是合格的？

再进行复筛：

“挑取初筛菌株的单菌落，接入装有 10 mL MPQ 培养基的发酵管中，28℃、180 r/min，振荡培养 72 h，然后将全部培养液倒入装有 50 mL MPQ 培养基的三角瓶中，28℃、180r/min 振荡培养 7 d。
真空抽滤器抽滤弃菌体，上清液加入 3 倍体积的无水甲醇置于 4℃冰箱过夜，10 000r/min 离心 20 min 取上清，pH 调至 3.5。

MPQ 培养基：MgSO4 1.5 g，（NH4）2SO4 3 g，KH2PO4 1.4 g，Na2HPO4 3 g，柠檬酸铁 30 mg，CaCl2·2H2O 30 mg，MnCl2·4H2O 0.5 mg，ZnSO4·7H2O 5 mg，CuSO4·5H2O 0.5mg，H2O 1000 mL。” 随后就用HPLC进行PQQ值得测定。

不明白为什么换成这个培养基了，怎么不用基本培养基呢？这两个有什么区别？

“真空抽滤器抽滤弃菌体，”然后又加入“上清液加入 3 倍体积的无水甲醇置于 4℃冰箱过夜”， 这步还是发酵啊，怎么把菌体去掉了，滤纸过滤不了微生物，发酵液继续发酵培养，去菌体的目的是为了HPLC做准备？？？


谢谢大家。。~~~

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1楼 2014-08-26 19:45:39
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