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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物菜鸟求助关于培养基污染长菌的问题！！！！
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鬼古女

银虫 (初入文坛)

[交流] 微生物菜鸟求助关于培养基污染长菌的问题！！！！

我是做植物内生真菌的，选用的分离培养基分别是高氏一号、察氏、萨氏、马丁氏，但是近两次接种后都出现了培养基周围成片的长菌，看着类似青霉属和一种白色的毛绒状，不知道是怎么回事？？求教各位微生物大侠们~~我的消毒方法是自来水冲洗干净，肥皂水浸泡30分钟，流水冲洗两个小时，切成小块之后，75%酒精3分钟，无菌水冲洗3~4遍，0.1%升汞3分钟，无菌水冲洗5~6遍，在无菌滤纸吸干水分后接种于各培养基平板中，培养基是121℃灭30分钟！！我实在是不知道问题出在哪里了...以前也没有这样大面积的污染过，就近两次开始出现了，而且组织块周围还没长出东西就大面积污染了
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1楼 2013-03-18 17:19:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

清源峰

金虫 (小有名气)
★
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
可能是在操作时超净台没弄干净，空气污染所致。
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3楼2013-03-18 20:16:22
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普通回帖

microxy

铁杆木虫 (著名写手)
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水 2013-03-25 09:25:52
你可以呀  还有个马甲！
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2楼2013-03-18 20:06:55
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lkj2596

金虫 (小有名气)
★
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
个人认为是在接菌或生长过程中有问题，可以把你的步骤再好好核实一遍。
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6楼2013-03-18 20:38:27
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110612/3360075/
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2530977
http://bbs.foodmate.net/thread-184420-1-1.html
http://zhidao.baidu.com/question/155616585.html
http://zhidao.baidu.com/question/291628045.html
http://bbs.foodmate.net/thread-543158-1-1.html
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7楼2013-03-18 20:38:46
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々暧-〃

版主 (文学泰斗)
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:26:58
祝福祝福~~~~~
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11楼2013-03-18 22:25:58
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
我这么怀疑过，把超净工作台里外和出风口都用75酒精搽了一遍，还是有污染不过比上一次好了一点点，苦恼啊……
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12楼2013-03-18 23:23:12
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
我这么怀疑过，把超净工作台里外和出风口都用75酒精搽了一遍，还是有污染不过比上一次好了一点点，苦恼啊……
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13楼2013-03-18 23:24:11
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
我这么怀疑过，把超净工作台里外和出风口都用75酒精搽了一遍，还是有污染不过比上一次好了一点点，苦恼啊……
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14楼2013-03-18 23:24:32
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wxj1986317

金虫 (正式写手)
你可以试试把超净台熏蒸一下，估计是真菌污染了
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17楼2013-03-19 10:14:14
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by wxj1986317 at 2013-03-19 10:14:14
你可以试试把超净台熏蒸一下，估计是真菌污染了

什么是醺蒸?怎么醺蒸?求详解
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18楼2013-03-19 11:25:37
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smyaifj

新虫 (初入文坛)
★
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
我觉得你可以用75%的乙醇喷洒超净台内部整个空间，然后紫外灭菌15min钟以上，之前的步骤如果都没有问题，那就是你操作的时候的问题了。还有你们的灭菌锅能达到要求吗？
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19楼2013-03-19 13:17:15
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静宇儿

铁虫 (初入文坛)
★
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
接种的工具是不是没灭菌彻底啊
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20楼2013-03-19 17:01:41
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gcworm

木虫 (职业作家)
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:27:30
路过，帮你顶一下
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21楼2013-03-19 17:12:09
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redbull2011

捐助贵宾 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在哪儿操作的呢？以前我们做实验，老有真菌污染，，后来关掉安全柜的气流，就再也没污染了，，可能是真菌孢子容易扩散
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22楼2013-03-20 01:38:23
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mengtaji

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超警工作台是可以用甲醛熏蒸的
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23楼2013-03-20 08:30:59
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
莫非你是将植物切成块直接放到培养基上》？？？？？？？？
god!交给你一个分离内生菌的新方法：把表皮处理干净之后。用灭菌的演播磨碎植物某一个部位，然后用生理盐水把磨碎后的液体清洗下来。做系列稀释，稀释成10^4倍的稀释液，涂布，挑取菌落。培养箱里面也要灭一下菌了，你培养箱里面肯定有霉菌污染了。要不然也不会污染呈这种程度的。
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24楼2013-03-20 08:37:23
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lmhzy1987

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
主要可能还是操作步骤中产生的，再把步骤严格下试试看
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25楼2013-03-20 08:53:54
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jincongcong

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怀疑是接种器械消毒不严格
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26楼2013-03-20 21:57:29
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by redbull2011 at 2013-03-20 01:38:23
在哪儿操作的呢？以前我们做实验，老有真菌污染，，后来关掉安全柜的气流，就再也没污染了，，可能是真菌孢子容易扩散

在无菌室做得啊，我都是开紫外时把超净台吹风打开，做得时候关上防止孢子散落，但是屋子的抽风没关，一直是这么做得呀，就这两次问题严重，而且组织块一点东西都不长
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27楼2013-03-21 10:39:45
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by redbull2011 at 2013-03-20 01:38:23
在哪儿操作的呢？以前我们做实验，老有真菌污染，，后来关掉安全柜的气流，就再也没污染了，，可能是真菌孢子容易扩散

谢谢
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28楼2013-03-21 10:41:40
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by jincongcong at 2013-03-20 21:57:29
怀疑是接种器械消毒不严格

恩，我再严格试一次，我也这么怀疑的
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29楼2013-03-21 10:43:48
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lanzhismile

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
除了操作台的因素，还可以考虑是不是倒平板的时候污染的，建议留几个空平板看看，或者在接种的时候留几个平板按照相同的操作但不接种，可以找出是哪个操作出的问题
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30楼2013-03-21 12:23:50
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jyh024

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该是染霉菌了，建议注意超净台先紫外严格灭菌15min，然后注意操作的时候物品的消毒杀菌问题和操作的时候各环节。
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31楼2013-03-21 19:20:23
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taoqi1986918

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得最大的可能就是操作过程中污染，仔细排查！做实验有时候就是这么的莫名其妙，别着急。
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32楼2013-03-21 19:29:58
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
32楼: Originally posted by taoqi1986918 at 2013-03-21 19:29:58
我觉得最大的可能就是操作过程中污染，仔细排查！做实验有时候就是这么的莫名其妙，别着急。

谢谢～
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33楼2013-03-22 11:53:10
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
24楼: Originally posted by molecula at 2013-03-20 08:37:23
莫非你是将植物切成块直接放到培养基上》？？？？？？？？
god!交给你一个分离内生菌的新方法：把表皮处理干净之后。用灭菌的演播磨碎植物某一个部位，然后用生理盐水把磨碎后的液体清洗下来。做系列稀释，稀释成1 ...

培养箱用什么消毒效果好点？
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34楼2013-03-24 13:46:27
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
34楼: Originally posted by 鬼古女 at 2013-03-24 13:46:27
培养箱用什么消毒效果好点？...

培养箱可以考虑用臭氧灭菌，培养箱里面都有灯管，你只需要把日光灯管更换成为紫外灯管就OK了。
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35楼2013-03-24 19:24:48
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鬼古女

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
35楼: Originally posted by molecula at 2013-03-24 19:24:48
培养箱可以考虑用臭氧灭菌，培养箱里面都有灯管，你只需要把日光灯管更换成为紫外灯管就OK了。...

我用紫外照了一个多小时呢，之前还用75乙醇喷洒了一遍，想说还有没别的杀菌效果更好点的试剂?84怎样?
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36楼2013-03-24 22:47:44
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wxj1986317

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 鬼古女 at 2013-03-19 11:25:37
什么是醺蒸?怎么醺蒸?求详解...

高锰酸钾加甲醛熏蒸，具体步骤及用量你可以上网搜索，我就不细述了
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37楼2013-03-25 10:42:28
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失落的豇豆4楼
2013-03-18 20:30   回复  
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水 2013-03-25 09:26:01
huwenzhou5楼
2013-03-18 20:34   回复  
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:26:17
yaoyao1458楼
2013-03-18 20:40   回复  
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:26:31
娜乌西卡SKY9楼
2013-03-18 21:15   回复  
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:26:43
licong952710楼
2013-03-18 21:50   回复  
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:26:50
haixiawu15楼
2013-03-19 09:07   回复  
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:27:10
wxj198631716楼
2013-03-19 10:12   回复  
鬼古女(金币+1): 谢谢参与
zhangxingc: 金币-1, 本帖谢绝灌水，谢谢合作 2013-03-25 09:27:16
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