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shuangzi8761银虫 (著名写手)
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关于刚果红染色的问题，求助！！！！！！！！！！！！！！！！！！！ 已有1人参与
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小弟最近做一个纤维素水解酶的底物活性染色，实验方案是先用蛋白（不变性）跑SDS-PAGE，然后用醋酸缓冲液（pH=5）洗掉胶上的SDS，后将胶放入1%CMC（醋酸缓冲液配）底物中60度孵育一小时，让酶水解CMC，拿出胶，放入0.1%刚果红中染色半小时，用1M NaCL脱色。 理论上酶在胶条的位置应该有透明圈，但是我做了几次，那个位置基本都是偏黑或者蓝色，只有偶然一次有透明圈，但是重复不出来。 注：A：实验中发现，我将胶条从60度的cmc拿出来，放入刚果红时，刚果红立刻变为墨蓝色。 B：染色后从刚果红中拿出来，整个胶全为红色，蛋白处无法看到任何变化。 C：NaCl洗脱一晚后，蛋白位置变为蓝色或者黑色。 如下图：  $JD)0}N{KGLV5%RPCXZ4UX8.png  7V70M2N_ID9SCZ%MBBV6(B6.png |
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3楼2015-09-13 16:31:06
1405981468a
新虫 (初入文坛)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2015-06-21 10:40:06
100