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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 求助，PLGA微球的TEM染色问题
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tanya_7

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助，PLGA微球的TEM染色问题

我用PLGA包裹牛血清白蛋白或者干扰素制成了微球，现在想用TEM看一下内部的蛋白分布，想请教一下应该如何固定蛋白以及具体的染色步骤，谢谢大家~~
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1楼2012-03-08 10:24:42
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 就是的！ 2012-03-22 16:47:29
TEM还能干这个事吗？按照TEM的原理，染色的东西可是看不到的
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能攻心则反侧自消，从古知兵非好战；不审势即宽严皆误，后来治蜀要深思
2楼2012-03-22 16:16:23
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tanya_7

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by duruo at 2012-03-22 16:16:23:
TEM还能干这个事吗？按照TEM的原理，染色的东西可是看不到的

恩，后来查到参考文献跟做电镜的老师讨论，决定还是用醋酸铀和柠檬酸铅染色，先尝试着做一下，不知道结果怎么样
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3楼2012-03-23 17:43:18
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长
★
lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-26 18:49:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by tanya_7 at 2012-03-23 17:43:18:
恩，后来查到参考文献跟做电镜的老师讨论，决定还是用醋酸铀和柠檬酸铅染色，先尝试着做一下，不知道结果怎么样

如果可行，麻烦楼主告诉我下结果，可以参考，谢谢
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能攻心则反侧自消，从古知兵非好战；不审势即宽严皆误，后来治蜀要深思
4楼2012-03-23 17:52:41
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mwyuer: 金币+1, 专家考核, 感谢回帖交流 2012-03-26 16:56:56
PLGA 和 牛血清白 对电子的通透性不同
不染色也可以区分吧

我很想知道 如何把微球固定，然后切片
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5楼2012-03-26 11:20:27
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tanya_7

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by duruo at 2012-03-23 17:52:41:
如果可行，麻烦楼主告诉我下结果，可以参考，谢谢

恩好的，打算四月初去做，也只是尝试一下，不知道效果怎么样
Using TEM to couple transient protein distribution and release for PLGA microparticles for potential use as vaccine delivery vehicles，关于操作步骤这篇文献讲得比较清楚，模型药物是卵清蛋白，可以参考一下
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6楼2012-03-27 09:19:38
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tanya_7

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liubin at 2012-03-26 11:20:27:
PLGA 和 牛血清白 对电子的通透性不同
不染色也可以区分吧

我很想知道 如何把微球固定，然后切片

参考文献是说要染色，打算先按照那个方法做一下，看看效果怎么样，打算用戊二醛和锇酸固定，然后用包埋剂包埋，超薄冷冻切片机切片
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7楼2012-03-27 09:25:12
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belladonae

金虫 (著名写手)

少将
这个也太酷了吧，我见过用TEM拍的微球，黑乎乎的什么也看不见，不过切片倒是没见过。
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8楼2012-05-15 20:38:51
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byqyli

铁杆木虫 (正式写手)
请问楼主用PLGA包裹牛血清蛋白的工艺是什么？也就是具体步骤，能否见告？我准备用PLGA包裹蛋白做疫苗，但属于菜鸟，周围也没有人懂，希望能告诉我具体方法，谢谢。本人邮箱:byqyli@163.com
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9楼2012-07-10 18:25:40
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tanya_7

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by byqyli at 2012-07-10 18:25:40
请问楼主用PLGA包裹牛血清蛋白的工艺是什么？也就是具体步骤，能否见告？我准备用PLGA包裹蛋白做疫苗，但属于菜鸟，周围也没有人懂，希望能告诉我具体方法，谢谢。本人邮箱:byqyli163.com

我用的是复乳法，先是将蛋白溶解当做内水相，PLGA用二氯甲烷溶解当做油相，做成初乳后加入PVA溶液中搅拌做成复乳，然后把复乳倒入PVA溶液中固化就形成微球了，最后是离心收集及干燥。这个方法挺常见的很多文献都可以查到很详细的方法，因为不知道你的粒径要求，载药量之类的所以具体参数还得自己摸索一下
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10楼2012-07-12 16:20:27
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