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tanya_7

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助,PLGA微球的TEM染色问题

我用PLGA包裹牛血清白蛋白或者干扰素制成了微球,现在想用TEM看一下内部的蛋白分布,想请教一下应该如何固定蛋白以及具体的染色步骤,谢谢大家~~
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duruo

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
markar: 金币+1, 就是的! 2012-03-22 16:47:29
TEM还能干这个事吗?按照TEM的原理,染色的东西可是看不到的
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
2楼2012-03-22 16:16:23
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tanya_7

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by duruo at 2012-03-22 16:16:23:
TEM还能干这个事吗?按照TEM的原理,染色的东西可是看不到的

恩,后来查到参考文献跟做电镜的老师讨论,决定还是用醋酸铀和柠檬酸铅染色,先尝试着做一下,不知道结果怎么样
3楼2012-03-23 17:43:18
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

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lixiangde: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-03-26 18:49:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by tanya_7 at 2012-03-23 17:43:18:
恩,后来查到参考文献跟做电镜的老师讨论,决定还是用醋酸铀和柠檬酸铅染色,先尝试着做一下,不知道结果怎么样

如果可行,麻烦楼主告诉我下结果,可以参考,谢谢
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
4楼2012-03-23 17:52:41
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liubin

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mwyuer: 金币+1, 专家考核, 感谢回帖交流 2012-03-26 16:56:56
PLGA 和 牛血清白 对电子的通透性不同
不染色也可以区分吧

我很想知道 如何把微球固定,然后切片
5楼2012-03-26 11:20:27
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tanya_7

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by duruo at 2012-03-23 17:52:41:
如果可行,麻烦楼主告诉我下结果,可以参考,谢谢

恩好的,打算四月初去做,也只是尝试一下,不知道效果怎么样
Using TEM to couple transient protein distribution and release for PLGA microparticles for potential use as vaccine delivery vehicles,关于操作步骤这篇文献讲得比较清楚,模型药物是卵清蛋白,可以参考一下
6楼2012-03-27 09:19:38
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tanya_7

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liubin at 2012-03-26 11:20:27:
PLGA 和 牛血清白 对电子的通透性不同
不染色也可以区分吧

我很想知道 如何把微球固定,然后切片

参考文献是说要染色,打算先按照那个方法做一下,看看效果怎么样,打算用戊二醛和锇酸固定,然后用包埋剂包埋,超薄冷冻切片机切片
7楼2012-03-27 09:25:12
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belladonae

金虫 (著名写手)

少将

这个也太酷了吧,我见过用TEM拍的微球,黑乎乎的什么也看不见,不过切片倒是没见过。
8楼2012-05-15 20:38:51
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byqyli

铁杆木虫 (正式写手)

请问楼主用PLGA包裹牛血清蛋白的工艺是什么?也就是具体步骤,能否见告?我准备用PLGA包裹蛋白做疫苗,但属于菜鸟,周围也没有人懂,希望能告诉我具体方法,谢谢。本人邮箱:byqyli@163.com
9楼2012-07-10 18:25:40
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tanya_7

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by byqyli at 2012-07-10 18:25:40
请问楼主用PLGA包裹牛血清蛋白的工艺是什么?也就是具体步骤,能否见告?我准备用PLGA包裹蛋白做疫苗,但属于菜鸟,周围也没有人懂,希望能告诉我具体方法,谢谢。本人邮箱:byqyli163.com

我用的是复乳法,先是将蛋白溶解当做内水相,PLGA用二氯甲烷溶解当做油相,做成初乳后加入PVA溶液中搅拌做成复乳,然后把复乳倒入PVA溶液中固化就形成微球了,最后是离心收集及干燥。这个方法挺常见的很多文献都可以查到很详细的方法,因为不知道你的粒径要求,载药量之类的所以具体参数还得自己摸索一下
10楼2012-07-12 16:20:27
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