应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助！双酶切验证总切出来四条带，请亲们帮忙看看，非常着急啊！谢谢大家了！
51/1返回列表
查看: 4253  |  回复: 32
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

[求助] 求助！双酶切验证总切出来四条带，请亲们帮忙看看，非常着急啊！谢谢大家了！ 已有6人参与

本人近期在构建原核表达载体，用的是pET-32a载体，BamHI和Xhol酶切位点（在软件上搜索过了，目的基因不含这两个酶切位点），连接、转化好后，菌液PCR鉴定均未阳性，但是酶切，不论切1h,2h,3h，一直都是四条带，奇怪的很。麻烦大家帮我看看是怎么回事呢？谢谢大家了！
      下面是电泳图，1（目的基因1000bp左右）、3 （目的基因300左右）泳道是重组质粒双酶切的结果，2,4泳道是没被酶切的重组质粒。Marker不小心点错了，点成600的了。

求助！双酶切验证总切出来四条带，请亲们帮忙看看，非常着急啊！谢谢大家了！


求助！双酶切验证总切出来四条带，请亲们帮忙看看，非常着急啊！谢谢大家了！-1
93585E02CF1B31AAB0EC2CAA368D37C8.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-08-22 09:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-22 10:57:44
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-22 14:40:00
你的质粒，切了和不切的，大小几乎一样的。
而且，你的1应该是目的条带300吧，怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点，那你把原始载体切了看看。
最后，重新制备载体，片段，重新做。一定要酶切完全。
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-22 10:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)
为什么没有人呢？
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-22 09:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-22 10:21:34
你的质粒，切了和不切的，大小几乎一样的。
而且，你的1应该是目的条带300吧，怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点，那你把原始载体切了看看。
最后，重新制备载体，片段，重新做。 ...

哦，不好意思，说错了，1是300,3是1000的，原始载体我做过双酶切了，是一条带，载体应该没什么问题。如果用fermentas的酶，酶切一般酶切过长时间呢？
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-22 10:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

219308

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+5, ★有帮助 2014-08-22 16:05:27
你的酶不会是快速的吧？你试试半个小时
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-22 13:08:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-18 19:54 by 无际的草原
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 8/400 2026-03-17 16:57 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭