24小时热门版块排行榜    

查看: 4255  |  回复: 32
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

[求助] 求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了! 已有6人参与

本人近期在构建原核表达载体,用的是pET-32a载体,BamHI和Xhol酶切位点(在软件上搜索过了,目的基因不含这两个酶切位点),连接、转化好后,菌液PCR鉴定均未阳性,但是酶切,不论切1h,2h,3h,一直都是四条带,奇怪的很。麻烦大家帮我看看是怎么回事呢?谢谢大家了!
      下面是电泳图,1(目的基因1000bp左右)、3 (目的基因300左右)泳道是重组质粒双酶切的结果,2,4泳道是没被酶切的重组质粒。Marker不小心点错了,点成600的了。

求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了!


求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了!-1
93585E02CF1B31AAB0EC2CAA368D37C8.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-22 10:57:44
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-22 14:40:00
你的质粒,切了和不切的,大小几乎一样的。
而且,你的1应该是目的条带300吧,怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点,那你把原始载体切了看看。
最后,重新制备载体,片段,重新做。一定要酶切完全。
3楼2014-08-22 10:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

为什么没有人呢?
2楼2014-08-22 09:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-22 10:21:34
你的质粒,切了和不切的,大小几乎一样的。
而且,你的1应该是目的条带300吧,怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点,那你把原始载体切了看看。
最后,重新制备载体,片段,重新做。 ...

哦,不好意思,说错了,1是300,3是1000的,原始载体我做过双酶切了,是一条带,载体应该没什么问题。如果用fermentas的酶,酶切一般酶切过长时间呢?
4楼2014-08-22 10:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

219308

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+5, 有帮助 2014-08-22 16:05:27
你的酶不会是快速的吧?你试试半个小时
5楼2014-08-22 13:08:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-18 6/300 2026-03-18 22:15 by li123456789.
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +8 llllkkkhh 2026-03-18 8/400 2026-03-18 21:01 by Catalysis25
[考研] 0703化学调剂 +7 妮妮ninicgb 2026-03-15 11/550 2026-03-18 19:48 by macy2011
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 化工学硕306求调剂 +10 42838695 2026-03-12 10/500 2026-03-18 14:42 by haxia
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 307求调剂 +3 冷笙123 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:55 by macy2011
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
信息提示
请填处理意见