24小时热门版块排行榜    

查看: 4257  |  回复: 32
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

[求助] 求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了! 已有6人参与

本人近期在构建原核表达载体,用的是pET-32a载体,BamHI和Xhol酶切位点(在软件上搜索过了,目的基因不含这两个酶切位点),连接、转化好后,菌液PCR鉴定均未阳性,但是酶切,不论切1h,2h,3h,一直都是四条带,奇怪的很。麻烦大家帮我看看是怎么回事呢?谢谢大家了!
      下面是电泳图,1(目的基因1000bp左右)、3 (目的基因300左右)泳道是重组质粒双酶切的结果,2,4泳道是没被酶切的重组质粒。Marker不小心点错了,点成600的了。

求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了!


求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了!-1
93585E02CF1B31AAB0EC2CAA368D37C8.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

219308

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+5, 有帮助 2014-08-22 16:05:27
你的酶不会是快速的吧?你试试半个小时
5楼2014-08-22 13:08:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

为什么没有人呢?
2楼2014-08-22 09:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-22 10:57:44
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-22 14:40:00
你的质粒,切了和不切的,大小几乎一样的。
而且,你的1应该是目的条带300吧,怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点,那你把原始载体切了看看。
最后,重新制备载体,片段,重新做。一定要酶切完全。
3楼2014-08-22 10:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-22 10:21:34
你的质粒,切了和不切的,大小几乎一样的。
而且,你的1应该是目的条带300吧,怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点,那你把原始载体切了看看。
最后,重新制备载体,片段,重新做。 ...

哦,不好意思,说错了,1是300,3是1000的,原始载体我做过双酶切了,是一条带,载体应该没什么问题。如果用fermentas的酶,酶切一般酶切过长时间呢?
4楼2014-08-22 10:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见