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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 微生物gDNA琼脂糖凝胶电泳，问题
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WSXP1104

新虫 (小有名气)

[求助] 微生物gDNA琼脂糖凝胶电泳，问题 已有3人参与

琼脂糖凝胶电泳结果，如附件：
问题：1、样品1出现这中情况，有没有可能是上样量太大？
           2、样品2无条带？
            3、胶出现一半白一半稍黑的现象，是因为制胶时胶槽没有放平？

先谢谢了。

微生物gDNA琼脂糖凝胶电泳，问题
1.PNG
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1楼 2014-08-20 20:51:31
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by Vy49 at 2015-04-06 15:47:07
LZ，抱歉我不是来回答问题的，我是来继续请教的。我目前做的跟你很类似，我也出现了你类似的条带1和2，我想问一下你1的加样量有多大（浓度*体积）后，另外，你的第二条带的样本是确定没有DNA吗？我有没有跑出来的条 ...

1、时间太久了，浓度不记得了，确定是上样量太多了。
2、菌太少，提取的DNA太少。
3、P出来的条带亮吗？确定那个是你要的条带？
    我送样测序的两个样品（DNA）没有条带，但都P出来了。
4、我是提取肉中微生物DNA，用差数离心的方法收集菌体沉淀。
5、最重要的是，我是食品专业的，是半吊子，好多我也不会
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14楼2015-04-06 19:32:42
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考拉003

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSXP1104: 金币+1 2014-08-21 09:14:09
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-08-21 12:30:40
1,我之前跑胶也会出现这种问题，我也觉得可能是浓度太高了，你这是点了多少样品，太高的话可以点四五微升就够了。
2.没有条带
3.你说胶配完后是一边黑还是？我还没有遇到过，如果你放在扫胶仪中一半变黑的话是因为放置的问题，不要紧。
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不是微生物专业的却进入微生物行业
2楼2014-08-20 21:08:17
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 考拉003 at 2014-08-20 21:08:17
1,我之前跑胶也会出现这种问题，我也觉得可能是浓度太高了，你这是点了多少样品，太高的话可以点四五微升就够了。
2.没有条带
3.你说胶配完后是一边黑还是？我还没有遇到过，如果你放在扫胶仪中一半变黑的话是因为 ...

我点了5ul样品，微生物是10的9次方级别，用100ul buffer AE 洗脱DNA。

你一般是用多少去洗脱DNA？
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3楼2014-08-21 09:13:47
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-21 12:30:51
WSXP1104: 金币+1, ★有帮助 2014-08-21 15:25:29
胶出现一半白一半稍黑的现象，是因为制胶时胶加了EB，当你跑胶时，下面的EB就跑出去了，所以最后就没有EB了，这也是为什么跑着跑着那些Marker的小条带很模糊或者消失了的原因。
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4楼2014-08-21 10:29:19
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