| 查看: 302 | 回复: 0 | |||
[求助]
求助 虫友们 帮解决【定量PCR】 问题。
|
|
本人最近在做定量PCR过程中，出现了如下图中所出现的问题一些，望各位虫友帮忙解决一下，谢谢！。总结下来有： 1） 本人使用的生工编号：SK2957A（SGExcel UltraSYBR Mixture）试剂盒，运用的是一步定量PCR方法，每次跑提取质粒的各稀释倍数做标准曲线，很不错，扩增效率能保证在100%左右，R2基本上也能控制在0.95到1之间。 反应体系是：SYBR MIX+Primer1+Primer2+DNA Template+ ddH2O=12.5+0.5+0.5+2+9.5=25ul 反应条件是：见附图。 2）但是，每次做阴性对照（即以ddH2O为模板）时，总有扩增出现，Ct值出现在33-37之间。 3）样品DNA稀释10倍上样，扩增Ct重复性很差，并不像标线一样，重复性很好，而且溶解曲线温度和标线温度很不同。标线样品的溶解温度基本都是86度，而样品溶解温度都是78-84之间，是不是就说明没有扩增出目的片段啊？ 下图附上昨天晚上刚做的一次实验结果图谱。 图中蓝色线是未知样品，绿色是标样，红色是阴性对照。  标线-扩增曲线.png  反应条件.png  溶解曲线-2.png  扩增曲线-1.png  溶解曲线-1.png |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
关于大修补实验的问题 求虫友们帮帮忙。。。
已经有26人回复- HPLC仪器使用问题
已经有4人回复
- 求助各位分析大神关于海水成分测定的问题
已经有4人回复
- 求助：请各位虫友们帮我鉴定一下图片所示的鱼。谢谢！！！
已经有5人回复
- 液相摸条件求助
已经有11人回复
- 色谱峰突然分不开了！！！急求
已经有29人回复
- 求助液相色谱测定激素遇到的一些问题，请知道的人回答哈~~
已经有4人回复
- 求助：液相色谱测定中出现的问题，请知道的人回答哈~
已经有21人回复
- 色谱条件无法重现
已经有15人回复
- 期刊分区求助！！急~~虫友们帮帮忙
已经有7人回复
- 液相色谱质谱问题
已经有4人回复
- 求助虫友们帮解决问题~相同的液相色谱条件，换了一台仪器就无法重现，求原因
已经有39人回复
- 求助求助，急啊，请各位虫友帮忙翻一下评审的这句话，非常感谢
已经有4人回复
- 微谱求助 望虫友帮忙
已经有4人回复
- 求助JI美国签证问题，非常着急！请虫友们援助
已经有10人回复
- 求助虫友们几个投稿后的问题，急！
已经有8人回复
- 【求助】虫友们帮我看下接下来我该怎么办？
已经有3人回复
- 【求助】求助各位虫友分子筛的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】麻烦各位虫友指点一下，问题很简单，我却不懂啊！！！
已经有16人回复
- 【求助】安装vc6出问题啦，虫友们帮帮
已经有4人回复
- 【求助/交流】各位虫友请帮助一下
已经有5人回复
- 求助烧釜的虫友们
已经有15人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人