应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白质相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之检测不出
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知（长期有效）
51/1返回列表
查看: 3464  |  回复: 22
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sakura01_22

木虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之检测不出

如题，在蛋白质相互作用研究中，IP检测，蛋白A能拉下蛋白B，但是蛋白B IP蛋白A时，检测不出。重复3遍左右，依然检测不出，希望哪位虫友能帮忙解答一下。是否存在相互作用只能单方面pull-down的情况，这种情况如何解释？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 分子生物实验及蛋白纯化结晶相关链接 蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
心怀希望，放飞梦想！
1楼2014-08-17 11:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2014-08-19 20:40:14
下面提供给楼主解决问题的方法：

蛋白质-蛋白质相互作用的方法有的是，最省事的就是直接用分子生物学软件预测，再有：In Vivo Protein Cross-Linking,Mapping Protein-Ligand Interactions by hydroxyl-Radical Protein Footprinting,用MALDI-MS也可以，这些实验都不费事。
请参考：Haian Fu edits ,Protein-Protein Interactions,Humana Press,2004（唯一完整版）：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7764403
的第15章、第29章、第34章、第35章，还有使用各种光谱方法也行。

In Vivo Protein Cross-Linking还可以参考：GregT. Hermanson，Bioconjugate Techniques(2013,3rd edition)
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6709686

另外，在下在论坛里发过两篇蛋白质—多肽相互作用的长文，其研究方法也适用于 蛋白质-蛋白质相互作用，楼主可以参考。
1.确定蛋白质—多肽相互作用结合位点的实验设计：凌波丽个人总结之二
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6739957
2.多 肽 受 体 研 究 咨 询 与 回 复——凌波丽 个人总结 第五季
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7728986
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2014-08-19 01:55:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

dingchaoyue

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sakura01_22(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:28:26
sakura01_22: 金币+2 2014-08-19 10:34:46
可否用pull-down的方法严重一下b是否可以拉下a？你的那种情况我们组里面有人也出现过那种情况，后来用纯化蛋白用pull down方法解决的，而不是用抗体。当然，还有可能那两蛋白不互作，有a拉b的假阳性。
蛋白互作能否用bifc方法来试试？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-17 11:48:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sakura01_22(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:28:38
sakura01_22: 金币+2 2014-08-19 10:34:54
这种情况虽然少见，但却是可以出现的。具体到你的情况：
1、确证用A之抗体Co-IP B的真实性，具体说要有对照（同种属的control IgG对照）。
2、另选一种或几种B的抗体试一试。许多抗体并非适于IP实验，这时只能另选可能用的其他抗体。
3、用其他方法验证A-B间的相互作用（physical interaction），如GST pulldown assays等。
4、可以用mammalian two-hybrid assay在功能上（functional interaction）研究A-B间的相互作用。

Good luck！
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-17 12:11:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sakura01_22

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dingchaoyue at 2014-08-17 11:48:47
可否用pull-down的方法严重一下b是否可以拉下a？你的那种情况我们组里面有人也出现过那种情况，后来用纯化蛋白用pull down方法解决的，而不是用抗体。当然，还有可能那两蛋白不互作，有a拉b的假阳性。
蛋白互作能否 ...

GST-pull down和BIFC摸索起来都挺费时间的，我本来想用体内试验证明一下二者有相互作用，谁知道出现这种诡异的情况，anyway，谢谢亲的回复！
赞一下 回复此楼
心怀希望，放飞梦想！
4楼2014-08-18 16:50:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭