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swach

铁虫 (小有名气)

[求助] NCBI的Blast比对,出现 "No significant similarity found"已有3人参与

以前做16S,插入的片段是1.5K,这次插入的是470bp的片段,测序结果回来之后,用NCBI序列比对,就出现了如题的信息,没有比对结果,看网站的问题分析,可能是碱基序列太短,那应该怎么解决呢?以前16S的时候测序返回的序列很长,这次很短。是由于我插入的片段短吗?怎么解决呢?
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
swach(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 13:01:03
470bp并不短,16s rRNA基因保守性很高,如果比对出现了你这样的结果,几乎可以肯定连到载体上的序列不是该基因,是PCR、电泳、切胶回收等过程中的污染序列。或者做blast时,Program Selection选项你可以选择“Somewhat similar sequences (blastn)”而不是默认的“Highly similar sequences (megablast)”。
3楼2014-08-15 11:47:00
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
swach(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-15 13:00:54
我觉得序列不算短,那你可否把整个测序结果,不去掉载体部分,放进去比对一下
2楼2014-08-15 11:22:13
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swach

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2014-08-15 11:47:00
470bp并不短,16s rRNA基因保守性很高,如果比对出现了你这样的结果,几乎可以肯定连到载体上的序列不是该基因,是PCR、电泳、切胶回收等过程中的污染序列。或者做blast时,Program Selection选项你可以选择“Somew ...

如果是污染序列的话,不可能22个序列都被污染了吧!而且如果我选择“16S ribosomal RNA (Bacteria and Archaea”,就出现这个结果,但是如果选择“Nucleotide collection”就能比对出结果。
4楼2014-08-15 13:47:16
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by swach at 2014-08-15 13:47:16
如果是污染序列的话,不可能22个序列都被污染了吧!而且如果我选择“16S ribosomal RNA (Bacteria and Archaea”,就出现这个结果,但是如果选择“Nucleotide collection”就能比对出结果。...

那你选择“Nucleotide collection”时,比对上的都是什么结果呢?
5楼2014-08-15 14:03:07
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