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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有8人参与

各位虫友,最近构建载体出现一个问题:5.8kb左右的双酶切载体连接1.5kb左右的双酶切pcr产物,涂平板后长了几个菌落,当时心情那个激动啊无法言说!之后做了个菌体电泳,心瞬间冻到了冰点:菌体电泳条带显示几个菌落的电泳条带居然比原始载体(原初质粒没有进行酶切的)的要跑得快!!
其中1,2是原始质粒 3,4,5,6是抗性平板上长出菌落的菌体电泳图,为什么会是这种结果呢?载体构建
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  • 2014-08-12 08:57:10, 2.72 M

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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2014-08-12 10:36:42
将菌液用质粒提取试剂盒的试剂1和试剂11初步破壁后是质粒释放出来,让后直接电泳观察条带是否滞后,初步验证是否有外源片段成功连接上载体!...

谁教你这样做的啊?
你的质粒都没进行酶切,能判断大小吗?你做菌液PCR吧,比你这个简单,靠谱。
19楼2014-08-15 17:10:48
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

菌体电泳?什么是菌体电泳?上样口真亮啊。。。
Someone
2楼2014-08-12 10:27:17
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lhxbio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jiaoxiayoulu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 12:56:26
真牛!什么叫菌体电泳?正常程序应该是菌落PCR初步鉴定,然后提质粒酶切,条带大小正确,再送测序。
3楼2014-08-12 10:31:51
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒载体双酶切前是多大?怎么都没有Marker呢?
4楼2014-08-12 10:33:37
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