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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有8人参与

各位虫友,最近构建载体出现一个问题:5.8kb左右的双酶切载体连接1.5kb左右的双酶切pcr产物,涂平板后长了几个菌落,当时心情那个激动啊无法言说!之后做了个菌体电泳,心瞬间冻到了冰点:菌体电泳条带显示几个菌落的电泳条带居然比原始载体(原初质粒没有进行酶切的)的要跑得快!!
其中1,2是原始质粒 3,4,5,6是抗性平板上长出菌落的菌体电泳图,为什么会是这种结果呢?载体构建
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  • 2014-08-12 08:57:10, 2.72 M

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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by xzy0425 at 2014-08-12 12:18:20
你细胞破壁厚没有进行其他处理是吧,那你前面的跑得很快的条带就很有可能是宿主菌的DNA。

怎么可能呢,我用提取质粒的试剂盒中的试剂一和试剂二处理了!肯定是质粒条带的!
11楼2014-08-12 14:23:40
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查看全部 20 个回答

Hliotrope

木虫 (著名写手)

菌体电泳?什么是菌体电泳?上样口真亮啊。。。
Someone
2楼2014-08-12 10:27:17
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lhxbio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jiaoxiayoulu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 12:56:26
真牛!什么叫菌体电泳?正常程序应该是菌落PCR初步鉴定,然后提质粒酶切,条带大小正确,再送测序。
3楼2014-08-12 10:31:51
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒载体双酶切前是多大?怎么都没有Marker呢?
4楼2014-08-12 10:33:37
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