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fckgood

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩出的目的带,自己跑电泳 很亮,测序时为什么总说 浓度低,取消。。 已有6人参与

请教各位大侠:
       我扩的基因片段,自己跑了电泳,目的条带比maker亮,送测后,说 浓度低,取消测序,于是自己将之前预留的其中一管样自己再跑电泳看,目的条带还是比较亮;于是再扩,送7个样,仅1个出来了,其他结果还是如前;第三次扩了后,说 信号弱,无信号,无条带取消。。    请教大侠,这是哪里出了问题,浓度低、信号弱、无信号、无条带取消。。分别说明不同的问题还是同一问题呀?请问该如何解决呀?  不胜感激!
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fckgood at 2014-08-10 13:53:43
谢谢!我送的是未纯化的呀,扩了直接送的...

哦哦,也就是说,你是PCR完了之后直接送去产物测序的???
8楼2014-08-10 14:53:03
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:29:29
基本是同一问题。夏天的话可能质粒会在运输途中降解。另外你提了质粒,但是可能是假阳性。可以自己酶切鉴定好去测序,亦或者自己送引物
操蛋的XX
2楼2014-08-10 09:33:12
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fckgood(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:29:46
你是不是回收连接质粒载体送去测序的啊?
如果是这样子,那就有多个环节问题:
1 是不是回收出现了问题,你用的试剂盒回收的吗?可以在洗脱的时候洗脱两次,这样可以增加回收效率
2 连接质粒载体,不知道你用的是什么载体,不过我一般用T-easy,所以你要考虑连接载体上的环节
3 抽提质粒,不知道你用的什么方法,是试剂盒还是sol I II III,抽了质粒你可以先酶切自己验证一下
4 我觉得一般情况下,送去测序的路途上应该没有什么问题
3楼2014-08-10 09:48:48
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我遇到这种情况就换测序公司了,别纠结了…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-08-10 09:55:53
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