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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有2人参与

碱裂法提取质粒，10ml菌液，中间使用酚氯仿异戊醇抽提，异丙醇沉淀，70%乙醇洗涤，最后EB溶解DNA的，Nanopdrop1000 质粒浓度在2000ng/ul  跑胶 条带并不是很亮啊？如何解决？？影不影响后续酶切？
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深圳的东北人
1楼 2014-08-05 15:26:34
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
忘了说，在最后EB溶解质粒时加了RnaseA
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深圳的东北人
2楼2014-08-05 15:28:36
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“最后EB溶解DNA的”，大哥，你不要吓我啊，是TE吧，2ug/ul浓度很可以了，酶切绝对没问题啊
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3楼2014-08-05 16:39:25
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 16:39:25
“最后EB溶解DNA的”，大哥，你不要吓我啊，是TE吧，2ug/ul浓度很可以了，酶切绝对没问题啊

呀呀，不是溴化乙锭。。是哪个提取试剂盒里的
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深圳的东北人
4楼2014-08-05 16:53:05
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 16:39:25
“最后EB溶解DNA的”，大哥，你不要吓我啊，是TE吧，2ug/ul浓度很可以了，酶切绝对没问题啊

可是跑胶条带不亮啊，酶切后还能看到吗？
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深圳的东北人
5楼2014-08-05 16:54:50
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhuangkai520: 金币+5, ★有帮助 2014-08-05 19:40:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhuangkai520 at 2014-08-05 16:54:50
可是跑胶条带不亮啊，酶切后还能看到吗？...

2ug/ul浓度已经很高了，不应该不亮啊，你是不是有地方搞错了，是胶的问题？拍胶的机器问题？不然不科学啊
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6楼2014-08-05 17:02:20
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 17:02:20
2ug/ul浓度已经很高了，不应该不亮啊，你是不是有地方搞错了，是胶的问题？拍胶的机器问题？不然不科学啊...

额，要不我在试试？？？多加点染料，
要不我都怀疑里面都是些什么！！
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深圳的东北人
7楼2014-08-05 17:10:12
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuangkai520: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-08-05 19:40:29
碱裂法提取质粒，10ml菌液提完，70%酒精洗过晾干之后直接加TER溶解，不必抽提。
一般这样的质粒做酶切也可以切开、也做得下去，除非特殊要求，才抽提。
收集菌液-加溶液123-  醋酸钠+异丙醇在-20度半小时- 70%酒精洗-溶解-酶切
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8楼2014-08-05 18:43:35
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-05 18:43:35
碱裂法提取质粒，10ml菌液提完，70%酒精洗过晾干之后直接加TER溶解，不必抽提。
一般这样的质粒做酶切也可以切开、也做得下去，除非特殊要求，才抽提。
收集菌液-加溶液123-  醋酸钠+异丙醇在-20度半小时- 70%酒精 ...

谢谢，我试试，还有个问题想问下，异丙醇中醋酸钠加多少呢?
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深圳的东北人
9楼2014-08-05 19:28:14
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 16:39:25
“最后EB溶解DNA的”，大哥，你不要吓我啊，是TE吧，2ug/ul浓度很可以了，酶切绝对没问题啊

人家是Elution Buffer啦~

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天道酬勤
10楼2014-08-05 22:58:39
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