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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取 已有2人参与

碱裂法提取质粒,10ml菌液,中间使用酚氯仿异戊醇抽提,异丙醇沉淀,70%乙醇洗涤,最后EB溶解DNA的,Nanopdrop1000 质粒浓度在2000ng/ul  跑胶 条带并不是很亮啊?如何解决??影不影响后续酶切?
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深圳的东北人
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

忘了说,在最后EB溶解质粒时加了RnaseA
深圳的东北人
2楼2014-08-05 15:28:36
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
“最后EB溶解DNA的”,大哥,你不要吓我啊,是TE吧,2ug/ul浓度很可以了,酶切绝对没问题啊
3楼2014-08-05 16:39:25
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 16:39:25
“最后EB溶解DNA的”,大哥,你不要吓我啊,是TE吧,2ug/ul浓度很可以了,酶切绝对没问题啊

呀呀,不是溴化乙锭。。是哪个提取试剂盒里的
深圳的东北人
4楼2014-08-05 16:53:05
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 16:39:25
“最后EB溶解DNA的”,大哥,你不要吓我啊,是TE吧,2ug/ul浓度很可以了,酶切绝对没问题啊

可是跑胶条带不亮啊,酶切后还能看到吗?
深圳的东北人
5楼2014-08-05 16:54:50
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhuangkai520: 金币+5, 有帮助 2014-08-05 19:40:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhuangkai520 at 2014-08-05 16:54:50
可是跑胶条带不亮啊,酶切后还能看到吗?...

2ug/ul浓度已经很高了,不应该不亮啊,你是不是有地方搞错了,是胶的问题?拍胶的机器问题?不然不科学啊
6楼2014-08-05 17:02:20
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 17:02:20
2ug/ul浓度已经很高了,不应该不亮啊,你是不是有地方搞错了,是胶的问题?拍胶的机器问题?不然不科学啊...

额,要不我在试试???多加点染料,
要不我都怀疑里面都是些什么!!
深圳的东北人
7楼2014-08-05 17:10:12
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuangkai520: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-08-05 19:40:29
碱裂法提取质粒,10ml菌液提完,70%酒精洗过晾干之后直接加TER溶解,不必抽提。
一般这样的质粒做酶切也可以切开、也做得下去,除非特殊要求,才抽提。
收集菌液-加溶液123-  醋酸钠+异丙醇在-20度半小时- 70%酒精洗-溶解-酶切
8楼2014-08-05 18:43:35
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-05 18:43:35
碱裂法提取质粒,10ml菌液提完,70%酒精洗过晾干之后直接加TER溶解,不必抽提。
一般这样的质粒做酶切也可以切开、也做得下去,除非特殊要求,才抽提。
收集菌液-加溶液123-  醋酸钠+异丙醇在-20度半小时- 70%酒精 ...

谢谢,我试试,还有个问题想问下,异丙醇中醋酸钠加多少呢?
深圳的东北人
9楼2014-08-05 19:28:14
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2014-08-05 16:39:25
“最后EB溶解DNA的”,大哥,你不要吓我啊,是TE吧,2ug/ul浓度很可以了,酶切绝对没问题啊

人家是Elution Buffer啦~

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天道酬勤
10楼2014-08-05 22:58:39
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