30楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-01 11:54:51
哦，你的片段比我的大多了...

31楼: Originally posted by leonaliu2013 at 2014-08-01 11:58:06
我以前做过两个1100bp的片段融合成2200bp的片段，一次就成功了。条带很亮。我觉得就是引物好。但是融合的中间那对引物根本没法变，没法换引物，所以，只能换两端的。所以，完全是听天由命的节奏。...

32楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-01 12:05:23
是啊，没办法，那你就先一个一个p,然后再把这两个小的融合，最后再和你之前P出来的融合...

12楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-07-31 21:47:06
必须切胶纯化吗，我的两个片段跑胶看的话也很纯，没有其他杂带...

2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-07-31 09:30:06
应该是做overlap PCR吧？不知道你overlap的序列多长？模板浓度如何？另外，100bp左右的条带如果是一坨，可能是引物。

36楼: Originally posted by madam1020 at 2014-08-21 20:02:27
你好，我也要做overlap ,我的序列500多，两个片段的opt温度，一个是60多，一个是58，请问，退火温度应该怎么设？谢谢...

37楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-08-21 21:07:56
其实引物的退火温度是算出来的，并不准，最靠谱的方法你做个退火温度的剃度，优化一下。
...

38楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-23 15:55:11
嗯嗯，已解决，谢谢...