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Changhua1989新虫 (初入文坛)
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[求助]
表观遗传学实验——染色质免疫沉淀相关问题？ 已有2人参与
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本人之前是做微生物分子生态学的，最近由于工作需要，在学习表观遗传学，以前做学生没好好学分子生物学，现在看遗传这方面真是云里雾里的， 其中关于染色质免疫沉淀实验部分，一直搞不懂，它的研究目的是体内DNA与蛋白质相互作用，问几个问题：1. 这里的蛋白质，是不是就只是指组蛋白？ 2. DNA从组蛋白分开来不是拿去测序了吗？这时组蛋白作什么用？怎么研究它们间的关系？ 3. 实验中用抗原抗体的方法进行沉淀，这里的抗体是针对组蛋白设计的吗？ 4. 组蛋白不是都一样吗？难道不同基因的组蛋白不同？ 5. DNA拿去测序，也不能了解其甲基化情况吧？那测序到底什么用处？ 问的问题很幼稚，还请学霸们耐心解答！非常感谢！ |
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2015-01-11 18:53:04
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2015-01-11 18:53:04
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那要对B基因的调控顺序进行分析预测，看上面有哪些可能的response elements，也就是可能的转录因子结合位点或反应元件，在此基础上进行验证。验证步骤基本包括： 1、构建由B基因调控序列（启动子+增强子顺序）调控的报告基因，用此进行transient transfection luciferase assay（向细胞中共转染该报告基因和可能的转录因子表达载体），看所表达的转录因子是否对该报告基因有调控作用； 2、如果1有预期的结果，则进一步对可能的response elements进行突变，再按1的方法重复上述实验，目的是验证转录因子对B的调节作用确系由所推定的response elements介导。 3、在上述基础上，检测转录因子A对内源性B基因的表达调控，两个方面：一是向细胞中转染转录因子A，看B基因的表达（mRNA和蛋白）；另一方面，用siRNA knockdown转录因子A的表达，再看B基因的表达。 4、可以用ChIP assay验证转录因子A确是与内源性B基因之调控序列结合。 5、其他功能意义上的进一步研究。 希望有帮助，并祝顺利！ |
10楼2015-01-11 02:04:13
蜂鸟404
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3楼2014-07-27 14:25:20
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4楼2014-07-27 14:42:31
