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protein780铁虫 (小有名气)
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内毒素干扰实验，有些不理解，求组各路朋友帮忙解惑。 已有2人参与
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1.药典上说用未检查出内毒素的供试品稀释标准品，我的样品从未做过检测，怎么可能知道是否含有内毒素呢？ 2.我跳过干扰实验直接做凝胶限量实验，发现样品在最大稀释范围与鲎试剂反应时仍未阳性，这个怎么排除是否是因为有干扰增强的因素呢？ 3.抗体类药物在生产时内毒素最大限值是多少呢？有的说10EU/剂量，是这样的吗？ 4.干扰实验的原理是什么呢？“通过比较鲎试剂与内毒素在水溶液和供试品溶液中反应的差异程度，来确定供试品在该浓度下是否对BET检查有干扰”，这一说法，我不太明白，供试品里面肯定会有一部分内毒素的呀，再加入标准品，肯定会增加呈现阳性的概率。 |
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【答案】应助回帖
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protein780: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-07-28 12:15:29
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楼主这帖子发出来 问题大了 内毒素试验干扰试验是重中之重，不做干扰试验，内毒素完全可以别去做了。 1.楼主你说你的最大稀释倍数仍有干扰，首先你干扰试验就没做，你选用的鲎试剂灵敏度是多少。0.015到0.25都是，你选用的鲎试剂不同。你的最大稀释倍数和浓度也不一样，你本身直接操作就是盲目的错误。 2. 内毒素并不是所有品种都合适，你的PH范围在2到8么，你的样品中是否有高价金属离子这样的直接会和鲎试剂螯合，你内毒素试验如果要用到0.015 0.03的灵敏度鲎试剂才可以做的话，你就要去做热原了。 3.内毒素限度时通过你的说明书给药途径，给药量来计算的，药典上也说明了，考虑到联合用药。你的内毒素限度应该放到你计算限度的一半或者1/3. 楼主的1.4点是一个问题，干扰试验，供阳肯定要凝固，鲎试剂0.125eu相当于溶液加入这个鲎试剂，其中内毒素有0.125它就能凝固。 也就是说3中以下情况，对照凝固，供阳凝固，供试不凝固，水不凝固 你无干扰 对照凝固，供阳不凝固，供试不凝固，水不凝固 有干扰 对照凝固，供阳凝固，供试凝固，水不凝固 有干扰 你的第一点药典的意思就是你的供试品和标准品配制时。你的供试品浓度下溶液不会干扰鲎试剂。 个人觉得楼主与其急做试验，不如先慢下来，看看药典和操作规程在做，我上面写的都是药典里的，您现在的试验说难听的就是瞎做，浪费时间啊 |
6楼2014-07-26 13:59:53
protein780
铁虫 (小有名气)
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2楼2014-07-25 12:28:16
【答案】应助回帖
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protein780: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-25 17:12:05
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1、个人认为，这个“未检查出内毒素的供试品稀释标准品”指的是：在做干扰实验之前，肯定会做相应干扰预实验来确定供试品的合适浓度，而在此浓度下的供试品，用你确定的鲎试剂实验之后是不会有阳性反应的。也就是，此浓度的供试品，内毒素含量应是在你定的限值以内的； 2、你做供试品阳性反应了吗？如果做了，阳性反应不是阳性的话，才能证明你的供试品对结果是有干扰的。你可以检测一下PH值，看是否在合适的PH值范围内，像枸橼酸、组氨酸等等的PH干扰都很大； 3、内毒素限值是根据药典上的公式算出来的，如果觉得药典上的限值过大，可参考同类产品的内毒素限值，个人认为，严格一些是好事。并不是所有的抗体类药物的内毒素限值都是10EU/剂量； 4、这个就是一个回收实验。检查一下你选择的供试品浓度是否对鲎试剂反应无干扰。一般 |
3楼2014-07-25 14:28:04
protein780
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4楼2014-07-25 17:02:30
