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syp719

木虫 (正式写手)

[求助] SSR-PCR 杂带很多 求解决方案 已有2人参与

此图为SSR-PCR产物非变性PAGE电泳图谱,marker为20bp,第四条带为200bp,二倍体植物为什么这么多带,退火温度左边1-8为63.4度,右边8个为61.9度,上下游引物Tm值分别为59.8℃,59.6℃,是模板纯度不够还是PCR程序不适合还是反应体系不合适呢?求各位老师同学提供宝贵意见建议!谢谢!!!!
【备注:10ul反应体系PCRmix5-6ul,premierF/R各0.5ul,模板1ul(约40ng),ddH20补齐。
反应程序:94℃ 4min,94℃ 50S,63.4℃ 50S,72℃ 30S,30cycle,72℃ 7min,
电泳上样2ul,电泳40min,硝酸银染色,氢氧化钠甲醛溶液显色】

SSR-PCR 杂带很多  求解决方案
DSC04720.JPG
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

杂带一般都是非特异性条带引起的,可以尝试提高退火温度或使用热启动PCR酶扩增,超保真Taq酶(热启动型的)效果也很好。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-07-06 17:08:21
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

★ ★ ★ ★
syp719(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-07-22 08:34:19
杂带一般是非特异性扩增引起的,看lz的带跑的挺好的,也没有拖尾现象,只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗,如果lz觉得带多进行分析时较麻烦,那估计得换个引物,提高特异性!
有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
2楼2014-07-22 07:59:36
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syp719

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2014-07-22 07:59:36
杂带一般是非特异性扩增引起的,看lz的带跑的挺好的,也没有拖尾现象,只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗,如果lz觉得带多进行分析时较麻烦,那估计得换个引物,提高特异性!

哦,有人说对于二倍体生物而言,SSR一般1-2条带,我这为什么都是3条以上,分不清主带。染色浅的带要统计吗
好好品味生活!
3楼2014-07-22 09:09:50
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syp719

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2014-07-22 07:59:36
杂带一般是非特异性扩增引起的,看lz的带跑的挺好的,也没有拖尾现象,只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗,如果lz觉得带多进行分析时较麻烦,那估计得换个引物,提高特异性!

目的带应该是200bp,可是200-300bp之间好多样品3条带,300以上的也有几条染色清楚的要忽略不计吗
好好品味生活!
4楼2014-07-22 09:16:47
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