应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » SSR-PCR 杂带很多 求解决方案
51/1返回列表
查看: 2760  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

syp719

木虫 (正式写手)

[求助] SSR-PCR 杂带很多 求解决方案 已有2人参与

此图为SSR-PCR产物非变性PAGE电泳图谱，marker为20bp,第四条带为200bp,二倍体植物为什么这么多带，退火温度左边1-8为63.4度，右边8个为61.9度，上下游引物Tm值分别为59.8℃，59.6℃，是模板纯度不够还是PCR程序不适合还是反应体系不合适呢？求各位老师同学提供宝贵意见建议！谢谢！！！！
【备注：10ul反应体系PCRmix5-6ul,premierF/R各0.5ul,模板1ul(约40ng），ddH20补齐。
反应程序：94℃ 4min,94℃ 50S,63.4℃ 50S,72℃ 30S,30cycle,72℃ 7min,
电泳上样2ul,电泳40min,硝酸银染色，氢氧化钠甲醛溶液显色】

SSR-PCR 杂带很多  求解决方案
DSC04720.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢
好好品味生活！
1楼 2014-07-21 20:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
杂带一般都是非特异性条带引起的，可以尝试提高退火温度或使用热启动PCR酶扩增，超保真Taq酶（热启动型的）效果也很好。。。
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-07-06 17:08:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece
★ ★ ★ ★
syp719(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-07-22 08:34:19
杂带一般是非特异性扩增引起的，看lz的带跑的挺好的，也没有拖尾现象，只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗，如果lz觉得带多进行分析时较麻烦，那估计得换个引物，提高特异性！
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
2楼2014-07-22 07:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syp719

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2014-07-22 07:59:36
杂带一般是非特异性扩增引起的，看lz的带跑的挺好的，也没有拖尾现象，只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗，如果lz觉得带多进行分析时较麻烦，那估计得换个引物，提高特异性！

哦，有人说对于二倍体生物而言，SSR一般1-2条带，我这为什么都是3条以上，分不清主带。染色浅的带要统计吗
赞一下 回复此楼
好好品味生活！
3楼2014-07-22 09:09:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syp719

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2014-07-22 07:59:36
杂带一般是非特异性扩增引起的，看lz的带跑的挺好的，也没有拖尾现象，只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗，如果lz觉得带多进行分析时较麻烦，那估计得换个引物，提高特异性！

目的带应该是200bp,可是200-300bp之间好多样品3条带，300以上的也有几条染色清楚的要忽略不计吗
赞一下 回复此楼
好好品味生活！
4楼2014-07-22 09:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +4 S.H1 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:49 by winsuccess
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +10 yangfz 2026-03-17 10/500 2026-03-18 20:14 by walc
[考研] 0703化学调剂 +7 妮妮ninicgb 2026-03-15 11/550 2026-03-18 19:48 by macy2011
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +3 蔡大美女 2026-03-13 3/150 2026-03-18 15:53 by jhhcooi
[教师之家] 焦虑 +8 水冰月月野兔 2026-03-13 12/600 2026-03-18 15:27 by 咪呜喵呜
[考研] 314求调剂 +8 无懈可击的巨人 2026-03-12 8/400 2026-03-18 14:50 by haxia
[考研] 化工学硕306求调剂 +10 42838695 2026-03-12 10/500 2026-03-18 14:42 by haxia
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 9/450 2026-03-18 14:13 by 脱颖而出
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭