应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » SSR-PCR 杂带很多 求解决方案
51/1返回列表
查看: 2751  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

syp719

木虫 (正式写手)

[求助] SSR-PCR 杂带很多 求解决方案 已有2人参与

此图为SSR-PCR产物非变性PAGE电泳图谱，marker为20bp,第四条带为200bp,二倍体植物为什么这么多带，退火温度左边1-8为63.4度，右边8个为61.9度，上下游引物Tm值分别为59.8℃，59.6℃，是模板纯度不够还是PCR程序不适合还是反应体系不合适呢？求各位老师同学提供宝贵意见建议！谢谢！！！！
【备注：10ul反应体系PCRmix5-6ul,premierF/R各0.5ul,模板1ul(约40ng），ddH20补齐。
反应程序：94℃ 4min,94℃ 50S,63.4℃ 50S,72℃ 30S,30cycle,72℃ 7min,
电泳上样2ul,电泳40min,硝酸银染色，氢氧化钠甲醛溶液显色】

SSR-PCR 杂带很多  求解决方案
DSC04720.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢
好好品味生活！
1楼 2014-07-21 20:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syp719

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2014-07-22 07:59:36
杂带一般是非特异性扩增引起的，看lz的带跑的挺好的，也没有拖尾现象，只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗，如果lz觉得带多进行分析时较麻烦，那估计得换个引物，提高特异性！

目的带应该是200bp,可是200-300bp之间好多样品3条带，300以上的也有几条染色清楚的要忽略不计吗
赞一下 回复此楼
好好品味生活！
4楼2014-07-22 09:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece
★ ★ ★ ★
syp719(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-07-22 08:34:19
杂带一般是非特异性扩增引起的，看lz的带跑的挺好的，也没有拖尾现象，只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗，如果lz觉得带多进行分析时较麻烦，那估计得换个引物，提高特异性！
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
2楼2014-07-22 07:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syp719

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2014-07-22 07:59:36
杂带一般是非特异性扩增引起的，看lz的带跑的挺好的，也没有拖尾现象，只是带比较多。一般做ssr-pcr不就是比较基因组差异性吗，如果lz觉得带多进行分析时较麻烦，那估计得换个引物，提高特异性！

哦，有人说对于二倍体生物而言，SSR一般1-2条带，我这为什么都是3条以上，分不清主带。染色浅的带要统计吗
赞一下 回复此楼
好好品味生活！
3楼2014-07-22 09:09:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jbhu220

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
syp719: 金币+6, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-07-24 08:43:13
一般来说SSR产物有1-2条带，呈共显性，最好是single-locus变异。你这个引物可能设计不好，没有出现变异，而且非特异扩增很多，我估计有变异也是呈显性的
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-23 15:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 7/350 2026-03-17 20:20 by 花125533
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 085600材料与化工 +4 安全上岸！ 2026-03-16 4/200 2026-03-17 14:02 by 勇敢太监王公公
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +4 梨花珞晚风 2026-03-17 4/200 2026-03-17 13:38 by houyaoxu
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭