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石小木

新虫 (初入文坛)

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专业: 食品科学基础

[求助] 关于血液游离氨基酸测定，重复非常不好。

哪位高手用氨基酸自动分析仪测过血液游离氨基酸的，请教。
本人测量不同饲喂处理大鼠的血液游离氨基酸水平，用的是日立8900的氨基酸自动分析仪，每种饲喂处理有10个生物学重复（只老鼠），但相同处理老鼠血清样本测得的游离氨基酸水平差异很大：这里摘录5个同处理组样本，总游离氨基酸(一通道+二通道，单位nmol/20ul)分别是：76.731, 48.929,    45.422，91.027，  95.495  。
1、请问懂得血液生理的高手，是不是不同老鼠血液游离氨基酸水平就是差这么大啊？
2、样品处理方式如下：断头取血，当天离心血样（3000g,15min）,吸取上层血清冻存。吸取血清样品50ul置于1.5ml离心管，加入150uL 50g/L的磺基水杨酸沉淀蛋白，20000r/m转离心10分钟，离心后用1ml针管吸取上清，过0.22um滤膜过滤，滤液注入到150ul的进样瓶内插管中，用于游离氨基酸的分析。样品制备方法是否有错？
3、使用了上样品中加内插管上扬，内插管150ul,高度到达样品瓶中间的刻度线，进样针，被工程师向上调整了4mm,说是防止触到内插管底，在操作软件系统中可以看出，同组的峰型，峰高、面积基本一致，但出来的结果很不一致，
4、检测的是：P-Ser磷酸丝氨酸、Tau牛磺酸、PEA磷酸乙醇胺、Urea尿素、Asp天冬氨酸、Thr苏氨基、Ser丝氨酸、Glu谷氨酸、α-AAAα-氨基乙二酸、Gly甘氨酸、Cit瓜氨酸、Ala丙氨酸、α-ABAα-氨基丁酸、Val缬氨酸、Cys半胱氨酸、Met蛋氨酸、Cysthi胱硫醚、Ile异亮氨酸、Leu亮氨酸、Tyr酪氨酸、Phe苯丙氨酸、β-Alaβ-丙氨酸、β-AiBAβ-氨基异丁酸、g-ABAγ-氨基丁酸、EOHNH2乙醇胺、Hylys羟赖氨酸、Orn鸟氨酸、Lys赖氨酸、1Mehis1-甲基组氨酸、His组氨酸、3Mehis3-甲基组氨酸、Car肌肽、Arg精氨酸、Hypro羟脯氨酸、Pro脯氨酸，共35 种游离氨基酸的含量。
样品多数不含有：α-AAAα-氨基乙二酸、sar肌氨酸、Car肌肽、Ans鹅肌肽。其他氨基酸峰型都很好。
5、相同处理组样品在操作软件结果峰型演示中拟合度都很好，尤其是tau完全重合,但越向后，过了NH3的峰只后，拟合度就很差了（Arg  lys）等。这跟系统有没有什么关系？
6、峰图中，谷氨酸和他临近的一个峰总是分不开，不知是是什么东西？（见附件图片）
谢谢了。

处理D编号11的样品一通道峰图.jpg

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