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sdwfpzf

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:β-catenin的免疫荧光做不出来!!!

紧急求助:小弟最近做β-catenin的免疫荧光,做不出来!!!快疯了!!!具体情况如下:
1、用的DF-1细胞,一种鸡胚成纤维细胞;尝试过sp20细胞,也做不出来。
2、固定液用的丙酮和乙醇(3:2)
3、triton x-100是否添加都尝试过。
4、一抗浓度1:100,1:200,1:500都尝试过;作用时间4℃过夜和37℃1h均用过。
5、一抗浓度1:100,1:200,1:500都尝试过;37℃1或2h均尝试过。(另二抗质量没问题,别的同学用的不错)
一抗是买的santa cruz,难道是一抗原因?
β-catenin是膜蛋白,跟我实验流程有关系?
请各位大侠支招!在此谢过!
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yangyang6868

铁虫 (初入文坛)

★ ★
youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 09:20:30
试试甲醇固定。
2楼2014-07-17 21:49:21
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


★ ★
youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 09:20:20
我用过beta-catenin的抗体是来自BD Transduction Laboratories,未曾用过Santa Cruz的抗体。另外我只做Western blot,未试过immune staining.....
3楼2014-07-17 22:12:44
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sdwfpzf

新虫 (初入文坛)

★ ★
youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 09:20:08
跟santa公司沟通,那边让用甲醛固定+抗原修复+封闭后再尝试一次。。。
郁闷!
4楼2014-07-19 08:19:25
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sdwfpzf

新虫 (初入文坛)

自己顶,求关注
5楼2014-07-22 18:36:35
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