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暮云深

金虫 (小有名气)

[求助] Tunel细胞实验求助

各位老师,我是第一次做tunel实验,有些问题请教一下。
下面是我做细胞tunel实验的过程,有不对的地方希望老师们指正。
一.细胞爬片的制作
1.预先将高压灭菌的盖玻片放入6孔板中( 问题1.我想每个组做二个片子,这里把盖玻片剪成二半,对后续的操作有影响吗?
                                                                  问题2.我准备将盖玻片放入6孔板中后先加入1mL的明胶润一下,然后用注射器弃去多余的明胶,大家有没有这么做过?                                                                                                  度                                                                        那明胶的浓度老师们有人知道吗?明胶是为了增强细胞爬片的)
2.将第二代软骨细胞用胰蛋白酶消化,制成密度为10的5次方/ml的细胞悬液。每孔1mL细胞悬液滴加于盖玻片上。含血清培养基培养24h后吸弃培养基,用PBS洗二遍后加上无血清的含有不同药物浓度的培养基作用24h后。收集盖片,4%多聚甲醛固定,存放。
                                                              (问题1.这里可以存放吗?我需要把我的盖玻片拿到其他地方做,在此步停顿可以吗?如果不行,还望老师推荐个时间点)
二。把固定好的玻片带到其他实验室,按试剂盒操作。
                老师们做Tunel有什么心得体会和注意点还望提点我一下。
                                                                   (问题低级,还望见谅)
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