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暮云深

金虫 (小有名气)

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[求助] Tunel细胞实验求助

各位老师，我是第一次做tunel实验，有些问题请教一下。
下面是我做细胞tunel实验的过程，有不对的地方希望老师们指正。
一.细胞爬片的制作
1.预先将高压灭菌的盖玻片放入6孔板中（问题1.我想每个组做二个片子，这里把盖玻片剪成二半，对后续的操作有影响吗？
                                                               问题2.我准备将盖玻片放入6孔板中后先加入1mL的明胶润一下，然后用注射器弃去多余的明胶，大家有没有这么做过？                                                                                                 度                                                                      那明胶的浓度老师们有人知道吗？明胶是为了增强细胞爬片的）
2.将第二代软骨细胞用胰蛋白酶消化,制成密度为10的5次方/ml的细胞悬液。每孔1mL细胞悬液滴加于盖玻片上。含血清培养基培养24h后吸弃培养基，用PBS洗二遍后加上无血清的含有不同药物浓度的培养基作用24h后。收集盖片,4%多聚甲醛固定,存放。
                                                            （问题1.这里可以存放吗？我需要把我的盖玻片拿到其他地方做，在此步停顿可以吗？如果不行，还望老师推荐个时间点）
二。把固定好的玻片带到其他实验室，按试剂盒操作。
            老师们做Tunel有什么心得体会和注意点还望提点我一下。
                                                               (问题低级,还望见谅)

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