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莘莘大白蚁

新虫 (小有名气)

[求助] 求助小鼠脾细胞增殖实验

为什么我做小鼠脾细胞增殖实验（MTT法，测多糖免疫活性），吸光值总是很低，亦或是出现污染，吸光值太高？请问各位专业大侠小鼠脾细胞增殖实验详细步骤和要注意的地方。还有我自配的红细胞裂解液（0.87%氯化铵缓冲液：0.83g氯化铵，0.1g碳酸氢钠，0.0038g乙二胺四乙酸二钠，溶于100ml蒸馏水中，湿热灭菌20min，4℃保存），有问题吗，为什么加此液后脾细胞悬液出现结块，细胞数减少很多。各位大侠如何配置红细胞裂解液？还有怎么提高脾细胞悬液活细胞的数量，整个操作过程要携带冰盒进行吗？本人食品专业，此实验做的异常艰难，不知道什么地方出了问题，恳请各位药理大侠指点，不胜感激！
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1楼2013-06-09 17:22:20
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tongting86

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
莘莘大白蚁: 金币+1, ★有帮助 2013-06-10 13:31:47
PSA: 金币+1, 3u 2013-06-13 12:26:59
我们做脾细胞分离时用的是1*红细胞裂解液，然后用PBS稀释10倍即可，操作最好在冰上进行。
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用勇气改变可以改变的，用胸怀接受不可改变的，加油
2楼2013-06-10 07:43:54
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莘莘大白蚁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tongting86 at 2013-06-10 07:43:54
我们做脾细胞分离时用的是1*红细胞裂解液，然后用PBS稀释10倍即可，操作最好在冰上进行。

1*红细胞裂解液是自配还是直接买的，能告诉我配方吗，老是觉得自己配的红细胞裂解液有问题。
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3楼2013-06-10 13:31:15
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tongting86

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
PSA: 金币+1, 谢谢提供 2013-06-13 12:27:11
引用回帖:
3楼: Originally posted by 莘莘大白蚁 at 2013-06-10 13:31:15
1*红细胞裂解液是自配还是直接买的，能告诉我配方吗，老是觉得自己配的红细胞裂解液有问题。...

我们是直接买的，是北京科悦达生物科技有限公司的产品，你可以查查看
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用勇气改变可以改变的，用胸怀接受不可改变的，加油
4楼2013-06-13 11:54:51
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rego_wang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tongting86 at 2013-06-10 07:43:54
我们做脾细胞分离时用的是1*红细胞裂解液，然后用PBS稀释10倍即可，操作最好在冰上进行。

红细胞裂解液不能用PBS稀释，PBS会终止裂解反应！！！
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5楼2014-09-28 11:32:36
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