应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 求助CFSE标记检测细胞增殖
131/2返回列表12下一页
查看: 4469  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

linfeifei

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助CFSE标记检测细胞增殖 已有1人参与

各位大虾好，我用CFSE标记细胞后流失细胞术检测，但没有见到多个峰，想请教一下问题在哪？我是用CFSE标记细胞后，FBS洗涤两次，ConA刺激72小时后检测的。但是我在显微镜下看到了明显的增殖克隆团。会不会是流失细胞仪的参数设置问题啊？
附图如下：

空白对照



偶然见到的一次实验结果，但也不是很好，后来再做不出来了



一般的实验结果都是这样的，只有一个峰，没有检测到细胞增殖
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-29 18:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

眼镜蛇

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

寻梦五世: 应助指数+1 2012-06-15 22:53:20
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看，电压没有问题。染色完成后，要适当终止，从37度取出来，放到冰上终止5－10分钟，然后再离心洗2－3次，洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题，要考虑：
流式gating的设置，是否正确？
死活细胞的排除，是否正确？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-06-15 07:31:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-15 07:31:14
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看，电压没有问题。染色完成后，要适当终止，从37度取出来，放到冰上终止5－10分钟，然后再离心洗2－3次，洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题，要 ...

谢谢回复，我现在正在试验是否是CFSE的浓度有了问题，可能使用剂量低了
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-15 09:53:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

眼镜蛇

金虫 (初入文坛)
有时候也不一定是浓度问题，是cfse变质了，本来是无色的，如果出现淡黄或者其他颜色，肯定不能用了。
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-16 00:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-16 00:14:05
有时候也不一定是浓度问题，是cfse变质了，本来是无色的，如果出现淡黄或者其他颜色，肯定不能用了。

高浓度的时候是无色的，不是说CFSE低浓度的时候是淡黄色的吗
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-16 11:04:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

krissy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正常情况下CFSE高低浓度都是无色的，在染了细胞之后，将细胞离心沉淀下来才显示黄色，高浓度颜色深一些，低浓度颜色浅些
赞一下 回复此楼
不以物喜，不以己悲
6楼2012-09-05 17:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2079301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-15 07:31:14
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看，电压没有问题。染色完成后，要适当终止，从37度取出来，放到冰上终止5－10分钟，然后再离心洗2－3次，洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题，要 ...

不同试剂公司的CFSE都需要染色后放在冰上吗？我的是碧云天的试剂盒·~~也遇到楼主的问题~~~
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-01 23:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2079301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linfeifei at 2012-06-15 09:53:47
谢谢回复，我现在正在试验是否是CFSE的浓度有了问题，可能使用剂量低了...

不知道楼主的问题解决了吗？我也有一样的问题，操作都是按照说明书来做的·~可是·~~感觉阴性组，就是裂解了红细胞，但是没有染色的小鼠脾细胞，似乎个头大一些····染色了的细胞感觉小了···用MTT检测剩余的孔，感觉细胞组的细胞都没有形成蓝色的结晶，但是没有染色的细胞就有看到结晶~~~~不知道是怎么回事？

不同试剂公司的CFSE都需要染色后放在冰上吗？我的是碧云天的试剂盒·~~也遇到楼主的问题~~~
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-01 23:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 2079301 at 2013-05-01 23:22:43
不同试剂公司的CFSE都需要染色后放在冰上吗？我的是碧云天的试剂盒·~~也遇到楼主的问题~~~...

我们后来的实验发现，这个是否放冰上对结果没什么影响
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-16 08:11:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2079301 at 2013-05-01 23:25:05
不知道楼主的问题解决了吗？我也有一样的问题，操作都是按照说明书来做的·~可是·~~感觉阴性组，就是裂解了红细胞，但是没有染色的小鼠脾细胞，似乎个头大一些····染色了的细胞感觉小了···用MTT检测剩余的 ...

应该染色组的也会有蓝色结晶吧，这两种实验方法的染色蛋白是不一样的啊
赞一下 回复此楼
10楼2013-09-16 08:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linfeifei 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 化学工程321分求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-15 18:49 by a不易
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭