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linfeifei

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助CFSE标记检测细胞增殖 已有1人参与

各位大虾好,我用CFSE标记细胞后流失细胞术检测,但没有见到多个峰,想请教一下问题在哪?我是用CFSE标记细胞后,FBS洗涤两次,ConA刺激72小时后检测的。但是我在显微镜下看到了明显的增殖克隆团。会不会是流失细胞仪的参数设置问题啊?
附图如下:

空白对照



偶然见到的一次实验结果,但也不是很好,后来再做不出来了



一般的实验结果都是这样的,只有一个峰,没有检测到细胞增殖
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linfeifei

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-15 07:31:14
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看,电压没有问题。染色完成后,要适当终止,从37度取出来,放到冰上终止5-10分钟,然后再离心洗2-3次,洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题,要 ...

谢谢回复,我现在正在试验是否是CFSE的浓度有了问题,可能使用剂量低了
3楼2012-06-15 09:53:47
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眼镜蛇

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

寻梦五世: 应助指数+1 2012-06-15 22:53:20
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看,电压没有问题。染色完成后,要适当终止,从37度取出来,放到冰上终止5-10分钟,然后再离心洗2-3次,洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题,要考虑:
流式gating的设置,是否正确?
死活细胞的排除,是否正确?
2楼2012-06-15 07:31:14
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眼镜蛇

金虫 (初入文坛)

有时候也不一定是浓度问题,是cfse变质了,本来是无色的,如果出现淡黄或者其他颜色,肯定不能用了。
4楼2012-06-16 00:14:05
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linfeifei

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-16 00:14:05
有时候也不一定是浓度问题,是cfse变质了,本来是无色的,如果出现淡黄或者其他颜色,肯定不能用了。

高浓度的时候是无色的,不是说CFSE低浓度的时候是淡黄色的吗
5楼2012-06-16 11:04:10
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