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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 求助CFSE标记检测细胞增殖
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linfeifei

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助CFSE标记检测细胞增殖 已有1人参与

各位大虾好，我用CFSE标记细胞后流失细胞术检测，但没有见到多个峰，想请教一下问题在哪？我是用CFSE标记细胞后，FBS洗涤两次，ConA刺激72小时后检测的。但是我在显微镜下看到了明显的增殖克隆团。会不会是流失细胞仪的参数设置问题啊？
附图如下：

空白对照



偶然见到的一次实验结果，但也不是很好，后来再做不出来了



一般的实验结果都是这样的，只有一个峰，没有检测到细胞增殖
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1楼 2012-05-29 18:01:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

眼镜蛇

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

寻梦五世: 应助指数+1 2012-06-15 22:53:20
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看，电压没有问题。染色完成后，要适当终止，从37度取出来，放到冰上终止5－10分钟，然后再离心洗2－3次，洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题，要考虑：
流式gating的设置，是否正确？
死活细胞的排除，是否正确？
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2楼2012-06-15 07:31:14
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普通回帖

linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-15 07:31:14
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看，电压没有问题。染色完成后，要适当终止，从37度取出来，放到冰上终止5－10分钟，然后再离心洗2－3次，洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题，要 ...

谢谢回复，我现在正在试验是否是CFSE的浓度有了问题，可能使用剂量低了
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3楼2012-06-15 09:53:47
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眼镜蛇

金虫 (初入文坛)
有时候也不一定是浓度问题，是cfse变质了，本来是无色的，如果出现淡黄或者其他颜色，肯定不能用了。
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4楼2012-06-16 00:14:05
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linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-16 00:14:05
有时候也不一定是浓度问题，是cfse变质了，本来是无色的，如果出现淡黄或者其他颜色，肯定不能用了。

高浓度的时候是无色的，不是说CFSE低浓度的时候是淡黄色的吗
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5楼2012-06-16 11:04:10
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krissy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正常情况下CFSE高低浓度都是无色的，在染了细胞之后，将细胞离心沉淀下来才显示黄色，高浓度颜色深一些，低浓度颜色浅些
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不以物喜，不以己悲
6楼2012-09-05 17:02:06
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2079301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 眼镜蛇 at 2012-06-15 07:31:14
可能是cfse的浓度有问题。从cfse的分布看，电压没有问题。染色完成后，要适当终止，从37度取出来，放到冰上终止5－10分钟，然后再离心洗2－3次，洗的时候缓冲液体积要是染色体系的10倍以上。如果这些都没有问题，要 ...

不同试剂公司的CFSE都需要染色后放在冰上吗？我的是碧云天的试剂盒·~~也遇到楼主的问题~~~
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7楼2013-05-01 23:22:43
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2079301

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linfeifei at 2012-06-15 09:53:47
谢谢回复，我现在正在试验是否是CFSE的浓度有了问题，可能使用剂量低了...

不知道楼主的问题解决了吗？我也有一样的问题，操作都是按照说明书来做的·~可是·~~感觉阴性组，就是裂解了红细胞，但是没有染色的小鼠脾细胞，似乎个头大一些····染色了的细胞感觉小了···用MTT检测剩余的孔，感觉细胞组的细胞都没有形成蓝色的结晶，但是没有染色的细胞就有看到结晶~~~~不知道是怎么回事？

不同试剂公司的CFSE都需要染色后放在冰上吗？我的是碧云天的试剂盒·~~也遇到楼主的问题~~~
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8楼2013-05-01 23:25:05
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linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 2079301 at 2013-05-01 23:22:43
不同试剂公司的CFSE都需要染色后放在冰上吗？我的是碧云天的试剂盒·~~也遇到楼主的问题~~~...

我们后来的实验发现，这个是否放冰上对结果没什么影响
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9楼2013-09-16 08:11:54
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linfeifei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2079301 at 2013-05-01 23:25:05
不知道楼主的问题解决了吗？我也有一样的问题，操作都是按照说明书来做的·~可是·~~感觉阴性组，就是裂解了红细胞，但是没有染色的小鼠脾细胞，似乎个头大一些····染色了的细胞感觉小了···用MTT检测剩余的 ...

应该染色组的也会有蓝色结晶吧，这两种实验方法的染色蛋白是不一样的啊
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10楼2013-09-16 08:13:56
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