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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 放线菌生长问题已有1人参与

各位大虾,小弟初来乍到,在实验方面遇到一些困难,望各位给与帮助!
我的菌是属于放线菌链霉菌块的,在液体培养的时候发现无碳源也可以生长,觉得无法理解。我的配方是高氏一号去淀粉。硝酸钾0.1%、硫酸镁005%、氯化钠0.05%、三水磷酸氢二钾0.05%、七水合硫酸亚铁0.001%。在250ml(50ml装液量)中居然生长了,同样的我做了一个对比,不接菌的同样的培养基没长。是用超纯水培养的培养基,离子是配成母液的。硝酸钾和三水磷酸氢二钾配在一起,氯化钠和硫酸镁配在一起,加入之后再单独称七水合硫酸亚铁,然后在121度,20min中灭菌,菌的话我是从高氏一号斜面用接种环挑一点,然后经玻璃珠打散后再加入到三角瓶中,(可以排除从斜面带来的碳源,各位想想,我只是轻轻一刮,如果说点了一点碳源的话,我觉的菌不会长得很多,而且我已经重复好几次了。不知道各位可以给小弟指点迷津吗?欢迎各位讨论。谢谢了!
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

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2楼: Originally posted by xuyunjian at 2014-07-14 22:08:44
我也曾经做过链霉菌方面的实验,当您这种情况实属少见。以下是我的几点猜测,可供参考:
1、您的玻璃珠有没有事先放入带水的小锥形瓶,一起灭菌?若没,那就染杂菌了
2、是不是在接种操作中,染杂菌
3、是不是您 ...

1、玻璃珠是提前一起灭菌的,这个没问题!
2、在无菌操作台中操作的,个人对操作还是挺有自信的,再者,如果说是在操作过程中染菌,液体培养基中无碳源,能染菌也够奇葩了吧!
3、药品的话都是离子,我都是用的新的,以防实验室其他人用钥勺混用,尽量注意带入其他碳源!
3楼2014-07-14 22:21:31
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

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3楼: Originally posted by wh-joseph at 2014-07-14 22:21:31
1、玻璃珠是提前一起灭菌的,这个没问题!
2、在无菌操作台中操作的,个人对操作还是挺有自信的,再者,如果说是在操作过程中染菌,液体培养基中无碳源,能染菌也够奇葩了吧!
3、药品的话都是离子,我都是用的新 ...

尽量避免带入其他碳源!
4楼2014-07-14 22:23:20
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

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7楼: Originally posted by nakamori0319 at 2014-07-15 08:25:52
确定长得是菌么?玻璃珠放到锥形瓶里摇,是会有浑浊产生的吧

摇瓶的时候是没玻璃珠的,玻璃珠只是刚开始用来打散孢子的,将孢子悬液接到要摇瓶里的。
8楼2014-07-15 10:29:04
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

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6楼: Originally posted by xuyunjian at 2014-07-14 23:43:49
那建议您做个菌种鉴定,看看属于哪类。或许是较特别的菌(自然界中存在许多种菌株,可以不利用有机碳源,但我现在为接触过链霉菌属的)????...

前任师姐已经做过鉴定了,是淡紫灰链霉菌!但是我现在有个问题,就是不知道菌体数增长了没?我担心的是会不会只是孢子长成菌丝了,而细胞没有增长,不知道可以给点建议吗?
9楼2014-07-15 10:31:13
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

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5楼: Originally posted by dllchina at 2014-07-14 23:02:47
试着换一种培养基,查了伯杰氏,说是化能有机营养,你这株菌是新种么?

应该不是新种,换培养基的话不知道可以换哪种呢?因为这个是放线菌!
10楼2014-07-15 10:32:53
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

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11楼: Originally posted by xuyunjian at 2014-07-16 21:15:20
那您做个干重分析吧,我也不知道。鄙人能力有限,若是孢子萌发,我个人感觉,您做个对照实验,减去该情况的影响,应该是可以的...

好的 看来还是需要多想一下,谢谢你!
12楼2014-07-16 22:01:39
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

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13楼: Originally posted by 刘烈奥 at 2014-07-16 22:03:12
我本科毕业做的也是放线菌,但是也是没碳源也能生长,估计是自养型的!坚定一下吧,或许师姐给的菌不纯啊!

你是在液体培养基上培养的吗?
14楼2014-07-16 22:34:23
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