| 查看: 5205 | 回复: 16 | ||
[求助]
有关细菌生物膜的构建、定量测定和染色观察问题 已有2人参与
|
||
小妹最近在体外构建细菌生物膜，并对其定量测定和染色用共聚焦观察。但是由于刚开始做，有一些问题想请教大家，希望知道的大神能给点建议。在这里先谢谢了~！ Q1： 首先是按照文献的办法在体外用96孔板构建生物膜，过程大概就是加入一定浓度的菌悬液，培养若干天，然后吸弃培养基，用灭菌水洗，然后加入1%的结晶紫染色0.5h，吸弃结晶紫，用95%乙醇溶解结晶紫，然后用酶标仪测OD值。但是在实验中，遇到一些问题：1、加入菌悬液后，若干天后吸弃培养基时，发现底部是有一些沉淀，这就是生物膜吗？2、在用灭菌水清洗时，觉得很容易把底部的细菌沉淀吸走，有什么好的办法？3、在用结晶紫染色后，要将结晶紫吸走时，同样也很容易将染色的细菌吸走，感觉这样的方法很不靠谱，想请问各路大神有什么好的办法解决吗？还是这个方法不可行（PS:感觉很多文献中都是这么做的呃o(╯□╰)o） Q2：第二个问题就是想用形成菌膜的细菌染色后用共聚焦观察，打算用的是InvitrogenLIVE/DEAD®BacLight试剂盒（货号L13152 ），里面是含有两种染色剂，一种是Syto9，可对所有细胞经行染色，另外一种是PI，对死细胞经行染色。若有大侠用过这个试剂盒的，先跪谢了！~ 。主要的问题就是1、用什么器皿观察好？是用激光共聚焦皿将细菌种在上面，若干天形成菌膜后，然后加入染料关系?还是在孔板中加入菌液，然后加入盖玻片，让菌膜黏附在玻片上，染色染色观察呢？如果是用玻片的话，是要让玻片沉浸在培养基中？还是让玻片悬浮在培养基中呢？2、这个试剂盒是两种染料粉末分装的，分别用2.5ml的水溶解后，然后混合成5ml 的染料，是直接将染料滴在玻片上观察吗？需要固定吗？以上是目前遇到的问题，有点多，万事开头难，希望知道的大神们能给点建议。这里先跪谢了~ .. |
回复此楼» 猜你喜欢
293调剂
已经有7人回复
-
288求调剂，一志愿华南理工大学071005
已经有5人回复
-
327求调剂
已经有8人回复
-
307求调剂
已经有14人回复
-
283分求调剂
已经有14人回复
-
一志愿211，0703化学305分求调剂
已经有16人回复
-
环境专硕调剂
已经有13人回复
-
338求调剂
已经有8人回复
-
求材料调剂，一志愿郑州大学289分
已经有17人回复
-
一志愿华南师范大学0702物理学305调剂
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 2014年度浙江省自然科学基金拟资助项目清单
已经有14人回复
- 体外细菌实验详细步骤
已经有3人回复
- 酶标仪测定氨基酸、多糖
已经有6人回复
- 聚焦生物仿制药系列
已经有6人回复
- 细菌生物膜染色（刀豆蛋白）
已经有15人回复
- 在生物膜结晶紫染色中结晶紫染液怎么配置
已经有10人回复
- 细菌染色计数的问题
已经有13人回复
- 如何在显微镜下鉴别细菌的死活
已经有17人回复
- 96孔板，用酶标仪测细菌生长曲线
已经有18人回复
- 显微镜下染色观察放线菌，如何区别是否污染细，即细菌和放线菌显微镜下形态区别
已经有5人回复
- 关于细菌染色，在荧光显微镜下观察技术
已经有6人回复
- 激光共聚焦显微镜观察微生物菌落具体怎么操作？
已经有11人回复
- 生物材料版求助交流帖索引【更新至20090404】
已经有12人回复
9楼2017-12-20 20:45:45
5楼2015-08-16 15:59:36
8楼2017-06-12 22:05:52
2楼2014-09-11 17:09:42
3楼2014-10-13 22:19:14
4楼2015-03-19 15:56:29
6楼2015-12-10 16:15:28
xzhjzykdx
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5233.3
- 散金: 278
- 红花: 1
- 帖子: 881
- 在线: 13.4小时
- 虫号: 6249891
- 注册: 2017-04-06
- 专业: 病原微生物变异与耐药
7楼2017-06-12 00:12:32
10楼2018-04-26 15:16:27
