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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？
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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？ 已有6人参与

我回收了我的目的片段，条带很暗且稍偏高，浓度有些低，连接表达载体一直连接不上，希望可以把我的目的片段浓缩一下。不知道该如何浓缩，希望知道的大侠们指点一下 谢谢
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1楼 2014-07-07 16:14:58
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-22 20:44:53
引用回帖:
51楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-22 15:22:11
好的 我重新回收后测了浓度 结果是15.7。我觉得这个浓度太小可能导致我连接不上吧。还是谢谢你啦、我在慢慢找找原因...

看来就是你割胶回收的问题了。优化下酶连体系吧
1.你的表达载体多大？也是割胶回收的吧，估计浓度也不高。以后载体双酶切后可以直接用PCR产物纯化试剂盒纯化，不割胶估计损失会小些，纯化后也测个浓度。你这次又涂了几个平板还是有转化子长出来但都是假阳性吗，本来你割胶回收后量就少如果还有假阳性那你载体的双酶切时间还得延长。你想想本来就少，如果还有没切开的那自然更连不上了，载体的浓度是你后期转化子多少的关键。
2.既然你是从T载体上切基因，那肯定是双酶切的产物而且必须割胶，那你以后基因再多加点，你现在连接体系是怎么分配的？基因多少，载体多少，体系多大？你基因浓度实在上不去的话那以后酶连体系不要加水全加基因。
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大家相互帮助哈
52楼2014-07-22 19:09:09
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-07 20:38:27
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-07-07 16:19:56
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-07-22 20:43:59
我们实验室有专门抽真空的仪器呢

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
3楼2014-07-07 23:12:13
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_深海渔_

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-07-07 16:19:56
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

我最近也遇到这方面问题，您能详细的讲一下吗？把纯化回收的DNA溶液放到柱子里然后重新离心吗？谢谢！

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-07-08 00:00:30
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