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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求5%分离胶配法
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蓦然凭栏

新虫 (初入文坛)

[求助] 求5%分离胶配法 已有2人参与

求5%分离胶配法，另外我的电泳图上面的带不直是怎么回事呢
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1楼 2014-07-07 10:21:50
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茂林修竹7

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
带不直的原因很多：
首先胶的原因：1）配好后，没有混匀就开始灌胶，导致胶的密度不一致；2）催化剂加的太多了，导致胶凝的速度太快，使得胶密度不均匀；3）上次的浓缩胶太少了，可适当增加；
其次电泳：电压太大，可先低压跑一段时间，再调高电压试试。
最后加样：1）加样不一致，导致各个孔之间的离子浓度不均一，也可能是带不齐；2）marker一般加量很少，加完marker可以再加点Buffer，使加样量和其他的样品之间一致，另外用完一般胶的所有孔，样品不足用空的Buffer代替。
PAGE胶的配方，见附件。
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    • 2014-07-08 14:27:05, 73.16 K
将欲取之必先与之
2楼2014-07-08 14:27:29
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蓦然凭栏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 茂林修竹7 at 2014-07-08 14:27:29
带不直的原因很多：
首先胶的原因：1）配好后，没有混匀就开始灌胶，导致胶的密度不一致；2）催化剂加的太多了，导致胶凝的速度太快，使得胶密度不均匀；3）上次的浓缩胶太少了，可适当增加；
其次电泳：电压太大 ...

谢谢，可使5%分离胶怎么配呢？
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3楼2014-07-08 14:54:49
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茂林修竹7

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓦然凭栏 at 2014-07-08 14:54:49
谢谢，可使5%分离胶怎么配呢？...

配制15ml 5%的分离胶：30% Acr-Bis (29:1)-2.5ml；H2O-8.4ml；1.5M Tris-HCl（ pH8.8）-3.8ml；10%SDS-150ul；10%过硫酸铵-150ul；TMED-8-15ul
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将欲取之必先与之
4楼2014-07-08 21:04:02
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caiyunsu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼上的把我想说的全说了，最大可能是胶不匀
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5楼2014-07-13 14:33:24
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