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蓦然凭栏

新虫 (初入文坛)

[求助] 求5%分离胶配法 已有2人参与

求5%分离胶配法,另外我的电泳图上面的带不直是怎么回事呢
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茂林修竹7

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
带不直的原因很多:
首先胶的原因:1)配好后,没有混匀就开始灌胶,导致胶的密度不一致;2)催化剂加的太多了,导致胶凝的速度太快,使得胶密度不均匀;3)上次的浓缩胶太少了,可适当增加;
其次电泳:电压太大,可先低压跑一段时间,再调高电压试试。
最后加样:1)加样不一致,导致各个孔之间的离子浓度不均一,也可能是带不齐;2)marker一般加量很少,加完marker可以再加点Buffer,使加样量和其他的样品之间一致,另外用完一般胶的所有孔,样品不足用空的Buffer代替。
PAGE胶的配方,见附件。

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  • 附件 1 : SDS-PAGE.pdf
  • 2014-07-08 14:27:05, 73.16 K
将欲取之必先与之
2楼2014-07-08 14:27:29
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蓦然凭栏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 茂林修竹7 at 2014-07-08 14:27:29
带不直的原因很多:
首先胶的原因:1)配好后,没有混匀就开始灌胶,导致胶的密度不一致;2)催化剂加的太多了,导致胶凝的速度太快,使得胶密度不均匀;3)上次的浓缩胶太少了,可适当增加;
其次电泳:电压太大 ...

谢谢,可使5%分离胶怎么配呢?
3楼2014-07-08 14:54:49
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茂林修竹7

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓦然凭栏 at 2014-07-08 14:54:49
谢谢,可使5%分离胶怎么配呢?...

配制15ml 5%的分离胶:30% Acr-Bis (29:1)-2.5ml;H2O-8.4ml;1.5M Tris-HCl( pH8.8)-3.8ml;10%SDS-150ul;10%过硫酸铵-150ul;TMED-8-15ul
将欲取之必先与之
4楼2014-07-08 21:04:02
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caiyunsu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼上的把我想说的全说了,最大可能是胶不匀
5楼2014-07-13 14:33:24
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