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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » PAGE浓缩胶漏样
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)

[求助] PAGE浓缩胶漏样 已有3人参与

最近做了很多次，实验结果都漏样了，怎么做都找不到原因，我特意观察了下，烧杯里面剩余的浓缩胶凝了之后还有点水在上面，这是不是因为板里面的胶也有部分水，导致板和胶之间有缝隙，怎么改进？我浓缩胶的配方是
5%  10ml  
30%ACR-BIS   1.7ml
0.5M TRIS-HCL  1.3ml
水                    6.8ml
SDS                0.1ML
APS                0.1ml
TEMED           0.008ml
求助有什么改进方法？
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1楼 2014-04-24 15:00:50
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
樱雪诺风: 金币+2, ★有帮助 2014-05-19 08:56:00
玻璃板擦干净，倒掉分离胶上层的水时，留几分钟让残留的水蒸发掉，再加压缩胶。
或者用异丙醇压胶，平一些，不容易与胶混合，容易挥发掉。
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2楼2014-04-25 18:12:31
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樱落雾海

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
樱雪诺风: 金币+1, ★有帮助 2014-05-19 08:56:07
我们配的5%的浓缩胶，处方如下：（以ml计）
水 2.7
30% Acrylamide/Bis 0.67
Tris 6.8      0.5
10%SDS   0.04
10% APS  0.04
TEMED  0.006
很快就凝了，你的估计没凝吧
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3楼2014-04-28 11:07:18
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sunrq516516

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
樱雪诺风: 金币+1, ★有帮助 2014-05-19 08:56:13
我们用的胶和三楼的配方一样，你的配方里APS浓度似乎低了一些，那个是凝胶用的。所以提高APS的浓度试一试，以及等凝胶时间长一点，烧杯里的凝胶速度似乎是比板子里的凝胶速度要快。
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Permanent head Damage
4楼2014-04-28 12:21:34
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-04-25 18:12:31
玻璃板擦干净，倒掉分离胶上层的水时，留几分钟让残留的水蒸发掉，再加压缩胶。
或者用异丙醇压胶，平一些，不容易与胶混合，容易挥发掉。

异丙醇压胶我试过，但是界面的胶出现白色的像胶干了一样，加水洗了之后，胶一下子好像被泡胀了，比之前加入的位置上去好多，界面还不平。
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5楼2014-05-19 08:53:16
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-04-28 12:21:34
我们用的胶和三楼的配方一样，你的配方里APS浓度似乎低了一些，那个是凝胶用的。所以提高APS的浓度试一试，以及等凝胶时间长一点，烧杯里的凝胶速度似乎是比板子里的凝胶速度要快。

三楼是4ml的配方，APS算下来是一样的，就TEMED不一样点
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6楼2014-05-19 08:55:46
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 樱雪诺风 at 2014-05-19 08:53:16
异丙醇压胶我试过，但是界面的胶出现白色的像胶干了一样，加水洗了之后，胶一下子好像被泡胀了，比之前加入的位置上去好多，界面还不平。...

我用异丙醇不会这样，你的胶不一样啊
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7楼2014-05-19 08:59:24
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sunrq516516

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 樱雪诺风 at 2014-05-19 10:53:16
异丙醇压胶我试过，但是界面的胶出现白色的像胶干了一样，加水洗了之后，胶一下子好像被泡胀了，比之前加入的位置上去好多，界面还不平。...

我们用纯乙醇压胶……可以试试
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Permanent head Damage
8楼2014-05-19 09:56:29
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-05-19 09:56:29
我们用纯乙醇压胶……可以试试...

我也试过，有一样的现象，不知道怎么回事
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9楼2014-05-21 09:20:57
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-19 08:59:24
我用异丙醇不会这样，你的胶不一样啊...

就是做SDS-PAGE 12%的配方，你们怎么做的？
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10楼2014-05-21 09:21:49
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