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DEAE柱多糖上样量过载的问题 已有2人参与
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各位虫友，我用DEAE纤维素纯化多糖，第一次上样300mg，水洗脱的曲线如图一， 其不同浓度的盐洗脱曲线的吸光度都很小，最大都不过0.2。其中之一，0.3Mol/lNacl洗脱液吸光度如图二。然后第二次上样就加大了上样量，上样量 为1g，其水洗脱曲线如图三，感觉很不正常，是不是上样量过载了？ 在此，请教虫友三个问题： 1. 为什么各种不同浓度盐洗脱时，测得吸光度都那么小，是没有什么酸性多糖吗？但我水洗脱的多糖也才18.9%。 2.上样1g，水洗脱的曲线很不正常，各位能帮我分析下吗，是不是上样量过载？ 3. 实验接下来该如何处理和进行，请各位给些建议，谢谢。 有价值的建议将大量追加金币！  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
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wolfman840
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【答案】应助回帖
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师兄，根据你图一和图二结合的来看，你的多糖应该是没挂在DEAE柱子上，请问你是用流穿模式做的吗？ 根据你图三的显示，你洗脱盐浓度不够高，不能一次性洗脱样品，建议你增加盐浓度。 不知道你具体的实验方案怎么设置，我的建议是，确定你目标产物的收率，纯度，活性的指标。然后测试DBC,拉梯度测试最佳洗脱盐浓度，优化洗脱方式，测试样品指标，继续优化。不知道对你的实验有帮助没有。 |
2楼2014-07-03 09:37:27
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wolfman840
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