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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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NNUKY

银虫 (小有名气)

[求助] 巣式PCR 已有1人参与

采用巣式PCR的方法,第一轮PCR产物一定要扩增出目的条带才能进行第二轮PCR扩增吗?
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匿名

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Thomas_HT

★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2014-06-27 16:38:46
本帖仅楼主可见
9楼2014-06-27 10:33:03
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普通回帖

ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
NNUKY: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-06-26 10:41:11
是的亲,第一轮稀释n倍后为第二轮模版,第一轮没有产物第二轮根本P不出来
2楼2014-06-26 10:08:26
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:08:26
是的亲,第一轮稀释n倍后为第二轮模版,第一轮没有产物第二轮根本P不出来

如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢?这样能进行第二轮PCR吗?我看有些人说第一轮没做出来,第二轮能做出来呢?
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3楼2014-06-26 10:42:31
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ltfe567

木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-06-26 13:17:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by NNUKY at 2014-06-26 10:42:31
如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢?这样能进行第二轮PCR吗?我看有些人说第一轮没做出来,第二轮能做出来呢?...

第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧,我做的巢式,大概流程是这样,一轮梯度PCR,摸索最佳退火温度,一轮模版稀释10倍,二轮扩增,结果条带单一明亮,可以参考下
4楼2014-06-26 10:45:49
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shellyxss

金虫 (正式写手)

楼主,我也问了和你一样的问题,里面有人回答说第一轮扩增结束不一定有结果,但是第二轮可以扩增出来,并且我就是这样的,所以我对这个问题也很好奇哈,如果楼主知道也告诉我一下吧~~~~
Always be curious about nature
5楼2014-06-26 15:04:33
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:45:49
第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧,我做的巢式,大概流程是这样,一轮梯度PCR,摸索最佳退火温度,一轮模版稀释10倍,二轮扩增,结果条带单一明亮,可以参考下...

谢谢哦!
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6楼2014-06-26 15:04:38
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Neo2000

木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:13:10
第一轮能出来肯定是好事,说明基因表达量高,你设计的引物特异性好,没出来也没关系,还有第二轮的嘛

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-06-26 15:37:24
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393658000

金虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:12:44
不要以为巢式PCR就是万能的,不管你怎么做 先把引物设好 特异性强一点的 这样你做起来才会方便的 引物不好的话会比较麻烦的
8楼2014-06-27 08:28:44
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匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:12:56
本帖仅楼主可见
10楼2014-06-27 10:34:51
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