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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巣式PCR
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NNUKY

银虫 (小有名气)

[求助] 巣式PCR 已有1人参与

采用巣式PCR的方法，第一轮PCR产物一定要扩增出目的条带才能进行第二轮PCR扩增吗？
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相信自己~~~~一直坚持！绝不放弃！！！
1楼 2014-06-26 09:48:11
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匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT
★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2014-06-27 16:38:46
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9楼2014-06-27 10:33:03
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普通回帖

ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
NNUKY: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-06-26 10:41:11
是的亲，第一轮稀释n倍后为第二轮模版，第一轮没有产物第二轮根本P不出来
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2楼2014-06-26 10:08:26
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:08:26
是的亲，第一轮稀释n倍后为第二轮模版，第一轮没有产物第二轮根本P不出来

如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢？这样能进行第二轮PCR吗？我看有些人说第一轮没做出来，第二轮能做出来呢？
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3楼2014-06-26 10:42:31
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ltfe567

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-06-26 13:17:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by NNUKY at 2014-06-26 10:42:31
如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢？这样能进行第二轮PCR吗？我看有些人说第一轮没做出来，第二轮能做出来呢？...

第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧，我做的巢式，大概流程是这样，一轮梯度PCR，摸索最佳退火温度，一轮模版稀释10倍，二轮扩增，结果条带单一明亮，可以参考下
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4楼2014-06-26 10:45:49
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shellyxss

金虫 (正式写手)
楼主，我也问了和你一样的问题，里面有人回答说第一轮扩增结束不一定有结果，但是第二轮可以扩增出来，并且我就是这样的，所以我对这个问题也很好奇哈，如果楼主知道也告诉我一下吧~~~~
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Always be curious about nature
5楼2014-06-26 15:04:33
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:45:49
第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧，我做的巢式，大概流程是这样，一轮梯度PCR，摸索最佳退火温度，一轮模版稀释10倍，二轮扩增，结果条带单一明亮，可以参考下...

谢谢哦！
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6楼2014-06-26 15:04:38
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:13:10
第一轮能出来肯定是好事，说明基因表达量高，你设计的引物特异性好，没出来也没关系，还有第二轮的嘛

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-06-26 15:37:24
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393658000

金虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:12:44
不要以为巢式PCR就是万能的，不管你怎么做 先把引物设好 特异性强一点的 这样你做起来才会方便的 引物不好的话会比较麻烦的
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8楼2014-06-27 08:28:44
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匿名

用户注销 (正式写手)

Thomas_HT
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:12:56
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10楼2014-06-27 10:34:51
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