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NNUKY

银虫 (小有名气)

[求助] 巣式PCR已有1人参与

采用巣式PCR的方法,第一轮PCR产物一定要扩增出目的条带才能进行第二轮PCR扩增吗?
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相信自己~~~~一直坚持!绝不放弃!!!
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金虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:12:44
不要以为巢式PCR就是万能的,不管你怎么做 先把引物设好 特异性强一点的 这样你做起来才会方便的 引物不好的话会比较麻烦的
8楼2014-06-27 08:28:44
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
NNUKY: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-06-26 10:41:11
是的亲,第一轮稀释n倍后为第二轮模版,第一轮没有产物第二轮根本P不出来
2楼2014-06-26 10:08:26
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:08:26
是的亲,第一轮稀释n倍后为第二轮模版,第一轮没有产物第二轮根本P不出来

如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢?这样能进行第二轮PCR吗?我看有些人说第一轮没做出来,第二轮能做出来呢?
相信自己~~~~一直坚持!绝不放弃!!!
3楼2014-06-26 10:42:31
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ltfe567

木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-06-26 13:17:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by NNUKY at 2014-06-26 10:42:31
如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢?这样能进行第二轮PCR吗?我看有些人说第一轮没做出来,第二轮能做出来呢?...

第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧,我做的巢式,大概流程是这样,一轮梯度PCR,摸索最佳退火温度,一轮模版稀释10倍,二轮扩增,结果条带单一明亮,可以参考下
4楼2014-06-26 10:45:49
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