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NNUKY

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[求助] 巣式PCR 已有1人参与

采用巣式PCR的方法，第一轮PCR产物一定要扩增出目的条带才能进行第二轮PCR扩增吗？

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1楼 2014-06-26 09:48:11

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ltfe567

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NNUKY: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-06-26 10:41:11

是的亲，第一轮稀释n倍后为第二轮模版，第一轮没有产物第二轮根本P不出来

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2楼2014-06-26 10:08:26

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2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:08:26
是的亲，第一轮稀释n倍后为第二轮模版，第一轮没有产物第二轮根本P不出来

如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢？这样能进行第二轮PCR吗？我看有些人说第一轮没做出来，第二轮能做出来呢？

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3楼2014-06-26 10:42:31

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ltfe567

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-06-26 13:17:51

引用回帖:

3楼: Originally posted by NNUKY at 2014-06-26 10:42:31
如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢？这样能进行第二轮PCR吗？我看有些人说第一轮没做出来，第二轮能做出来呢？...

第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧，我做的巢式，大概流程是这样，一轮梯度PCR，摸索最佳退火温度，一轮模版稀释10倍，二轮扩增，结果条带单一明亮，可以参考下

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4楼2014-06-26 10:45:49

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shellyxss

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楼主，我也问了和你一样的问题，里面有人回答说第一轮扩增结束不一定有结果，但是第二轮可以扩增出来，并且我就是这样的，所以我对这个问题也很好奇哈，如果楼主知道也告诉我一下吧

~~~~

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5楼2014-06-26 15:04:33

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引用回帖:

4楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:45:49
第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧，我做的巢式，大概流程是这样，一轮梯度PCR，摸索最佳退火温度，一轮模版稀释10倍，二轮扩增，结果条带单一明亮，可以参考下...

谢谢哦！

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6楼2014-06-26 15:04:38

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:13:10

第一轮能出来肯定是好事，说明基因表达量高，你设计的引物特异性好，没出来也没关系，还有第二轮的嘛

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7楼2014-06-26 15:37:24

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:12:44

不要以为巢式PCR就是万能的，不管你怎么做先把引物设好特异性强一点的这样你做起来才会方便的引物不好的话会比较麻烦的

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8楼2014-06-27 08:28:44

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10楼2014-06-27 10:34:51

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