10楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-27 10:34:51
另外  如果第二轮跑出来了条带  并且有拖尾再考虑稀释第一轮的引物  或这提高一点退火的温度 增加特异性的结合

4楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:45:49
第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧，我做的巢式，大概流程是这样，一轮梯度PCR，摸索最佳退火温度，一轮模版稀释10倍，二轮扩增，结果条带单一明亮，可以参考下...

12楼: Originally posted by NNUKY at 2014-07-03 09:32:35
我第一轮PCR目的片段出来了，因为条带不是特别亮，就没有稀释直接拿来做了第二轮PCR的模板，结果P出来的目的片段不对，并且就只有这一个片段，也没有杂带，这是怎么回事呢？...

13楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-07-03 14:44:42
亲 你的二轮引物最好BLAST检测一下，看看目的片段是多大...

14楼: Originally posted by NNUKY at 2014-07-03 16:26:25
我肯定目的片段大小是对的，但是出来的目的片段不对啊，是不是引物合成错了？...

15楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-07-03 16:32:33
你在哪里合成的啊？我是生工的，不行换一家试试，...

8楼: Originally posted by 393658000 at 2014-06-27 08:28:44
不要以为巢式PCR就是万能的，不管你怎么做 先把引物设好 特异性强一点的 这样你做起来才会方便的 引物不好的话会比较麻烦的

17楼: Originally posted by 通-仔 at 2014-07-08 22:17:39
第一轮和第二轮用的都是简并引物，都扩增不出来，怎么办...