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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-27 10:34:51
另外  如果第二轮跑出来了条带  并且有拖尾再考虑稀释第一轮的引物  或这提高一点退火的温度 增加特异性的结合

嗯嗯,非常感谢参与讨论!
相信自己~~~~一直坚持!绝不放弃!!!
11楼2014-06-28 16:36:17
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:45:49
第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧,我做的巢式,大概流程是这样,一轮梯度PCR,摸索最佳退火温度,一轮模版稀释10倍,二轮扩增,结果条带单一明亮,可以参考下...

我第一轮PCR目的片段出来了,因为条带不是特别亮,就没有稀释直接拿来做了第二轮PCR的模板,结果P出来的目的片段不对,并且就只有这一个片段,也没有杂带,这是怎么回事呢?
相信自己~~~~一直坚持!绝不放弃!!!
12楼2014-07-03 09:32:35
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ltfe567

木虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by NNUKY at 2014-07-03 09:32:35
我第一轮PCR目的片段出来了,因为条带不是特别亮,就没有稀释直接拿来做了第二轮PCR的模板,结果P出来的目的片段不对,并且就只有这一个片段,也没有杂带,这是怎么回事呢?...

亲 你的二轮引物最好BLAST检测一下,看看目的片段是多大
13楼2014-07-03 14:44:42
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-07-03 14:44:42
亲 你的二轮引物最好BLAST检测一下,看看目的片段是多大...

我肯定目的片段大小是对的,但是出来的目的片段不对啊,是不是引物合成错了?
相信自己~~~~一直坚持!绝不放弃!!!
14楼2014-07-03 16:26:25
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ltfe567

木虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by NNUKY at 2014-07-03 16:26:25
我肯定目的片段大小是对的,但是出来的目的片段不对啊,是不是引物合成错了?...

你在哪里合成的啊?我是生工的,不行换一家试试,
15楼2014-07-03 16:32:33
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-07-03 16:32:33
你在哪里合成的啊?我是生工的,不行换一家试试,...

嗯,好的!谢谢啦!
相信自己~~~~一直坚持!绝不放弃!!!
16楼2014-07-04 09:12:32
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通-仔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 393658000 at 2014-06-27 08:28:44
不要以为巢式PCR就是万能的,不管你怎么做 先把引物设好 特异性强一点的 这样你做起来才会方便的 引物不好的话会比较麻烦的

第一轮和第二轮用的都是简并引物,都扩增不出来,怎么办
17楼2014-07-08 22:17:39
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NNUKY

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 通-仔 at 2014-07-08 22:17:39
第一轮和第二轮用的都是简并引物,都扩增不出来,怎么办...

要不换换引物?还是反应条件没有优化。我后来换了引物就扩增出来了!
相信自己~~~~一直坚持!绝不放弃!!!
18楼2014-07-10 08:52:46
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