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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巣式PCR
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-27 10:34:51
另外  如果第二轮跑出来了条带  并且有拖尾再考虑稀释第一轮的引物  或这提高一点退火的温度 增加特异性的结合

嗯嗯，非常感谢参与讨论！
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11楼2014-06-28 16:36:17
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:45:49
第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧，我做的巢式，大概流程是这样，一轮梯度PCR，摸索最佳退火温度，一轮模版稀释10倍，二轮扩增，结果条带单一明亮，可以参考下...

我第一轮PCR目的片段出来了，因为条带不是特别亮，就没有稀释直接拿来做了第二轮PCR的模板，结果P出来的目的片段不对，并且就只有这一个片段，也没有杂带，这是怎么回事呢？
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12楼2014-07-03 09:32:35
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ltfe567

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by NNUKY at 2014-07-03 09:32:35
我第一轮PCR目的片段出来了，因为条带不是特别亮，就没有稀释直接拿来做了第二轮PCR的模板，结果P出来的目的片段不对，并且就只有这一个片段，也没有杂带，这是怎么回事呢？...

亲 你的二轮引物最好BLAST检测一下，看看目的片段是多大
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13楼2014-07-03 14:44:42
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-07-03 14:44:42
亲 你的二轮引物最好BLAST检测一下，看看目的片段是多大...

我肯定目的片段大小是对的，但是出来的目的片段不对啊，是不是引物合成错了？
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14楼2014-07-03 16:26:25
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ltfe567

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by NNUKY at 2014-07-03 16:26:25
我肯定目的片段大小是对的，但是出来的目的片段不对啊，是不是引物合成错了？...

你在哪里合成的啊？我是生工的，不行换一家试试，
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15楼2014-07-03 16:32:33
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-07-03 16:32:33
你在哪里合成的啊？我是生工的，不行换一家试试，...

嗯，好的！谢谢啦！
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16楼2014-07-04 09:12:32
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通-仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 393658000 at 2014-06-27 08:28:44
不要以为巢式PCR就是万能的，不管你怎么做 先把引物设好 特异性强一点的 这样你做起来才会方便的 引物不好的话会比较麻烦的

第一轮和第二轮用的都是简并引物，都扩增不出来，怎么办
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17楼2014-07-08 22:17:39
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 通-仔 at 2014-07-08 22:17:39
第一轮和第二轮用的都是简并引物，都扩增不出来，怎么办...

要不换换引物？还是反应条件没有优化。我后来换了引物就扩增出来了！
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18楼2014-07-10 08:52:46
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