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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巣式PCR
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NNUKY

银虫 (小有名气)

[求助] 巣式PCR已有1人参与

采用巣式PCR的方法，第一轮PCR产物一定要扩增出目的条带才能进行第二轮PCR扩增吗？
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相信自己~~~~一直坚持！绝不放弃！！！
1楼2014-06-26 09:48:11
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 手指缠胶带 at 2014-06-27 10:34:51
另外  如果第二轮跑出来了条带  并且有拖尾再考虑稀释第一轮的引物  或这提高一点退火的温度 增加特异性的结合

嗯嗯，非常感谢参与讨论！
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相信自己~~~~一直坚持！绝不放弃！！！
11楼2014-06-28 16:36:17
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
NNUKY: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-06-26 10:41:11
是的亲，第一轮稀释n倍后为第二轮模版，第一轮没有产物第二轮根本P不出来
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2楼2014-06-26 10:08:26
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NNUKY

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-06-26 10:08:26
是的亲，第一轮稀释n倍后为第二轮模版，第一轮没有产物第二轮根本P不出来

如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢？这样能进行第二轮PCR吗？我看有些人说第一轮没做出来，第二轮能做出来呢？
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相信自己~~~~一直坚持！绝不放弃！！！
3楼2014-06-26 10:42:31
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ltfe567

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-06-26 13:17:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by NNUKY at 2014-06-26 10:42:31
如果第一轮PCR产物有目的条带也有杂带呢？这样能进行第二轮PCR吗？我看有些人说第一轮没做出来，第二轮能做出来呢？...

第一轮有杂带的话可以切胶回收作为第二轮模版吧，我做的巢式，大概流程是这样，一轮梯度PCR，摸索最佳退火温度，一轮模版稀释10倍，二轮扩增，结果条带单一明亮，可以参考下
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4楼2014-06-26 10:45:49
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