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chenziping

金虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有2人参与

在构建载体,载体双酶切回收后,做阴性对照,自连接,转化后竟然长了很多菌落
                    同时,又做了酶切后的载体直接转化也是长了菌落
                    是不是酶切不完全,但是,酶切后我做了电泳发现载体是已经酶切了 和原载体电泳产物条带不同啊???载体是pGBKT-7,酶切位点是EcoR1,Nco1.为什么啊,请大家指点啊。
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chenziping

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-20 20:11:50
何必这么折腾,少切点质粒直接连外源片段就得了。记住重点,不必在这里浪费时间。

你好 我挑了大概四十几个单菌落 都是假阳性啊  不知道该咋办
4楼2014-06-20 22:53:01
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenziping(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-20 16:45:04
可能的原因:
1.载体回收时跑的时间有点短,切胶时污染了非载体带。
2.酶切后的载体直接转化长菌落是正常的,但是不会长太多,太多就错了。
3.切下的带有多大?
2楼2014-06-20 15:34:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-06-21 01:01:30
何必这么折腾,少切点质粒直接连外源片段就得了。记住重点,不必在这里浪费时间。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-06-20 20:11:50
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Renjingyu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chenziping at 2014-06-20 22:53:01
你好 我挑了大概四十几个单菌落 都是假阳性啊  不知道该咋办...

是不是方法不太对,用infusion做成功率还是挺高的
即将加入研究生的大军,迷茫!
5楼2014-06-21 10:19:14
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