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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
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chenziping

金虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有2人参与

在构建载体，载体双酶切回收后，做阴性对照，自连接，转化后竟然长了很多菌落
                    同时，又做了酶切后的载体直接转化也是长了菌落
                    是不是酶切不完全，但是，酶切后我做了电泳发现载体是已经酶切了 和原载体电泳产物条带不同啊？？？载体是pGBKT-7,酶切位点是EcoR1，Nco1.为什么啊，请大家指点啊。
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1楼 2014-06-20 15:13:10
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chenziping

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-20 20:11:50
何必这么折腾，少切点质粒直接连外源片段就得了。记住重点，不必在这里浪费时间。

你好 我挑了大概四十几个单菌落 都是假阳性啊  不知道该咋办
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4楼2014-06-20 22:53:01
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chenziping(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-20 16:45:04
可能的原因：
1.载体回收时跑的时间有点短，切胶时污染了非载体带。
2.酶切后的载体直接转化长菌落是正常的，但是不会长太多，太多就错了。
3.切下的带有多大？
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2楼2014-06-20 15:34:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-21 01:01:30
何必这么折腾，少切点质粒直接连外源片段就得了。记住重点，不必在这里浪费时间。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-06-20 20:11:50
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Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenziping at 2014-06-20 22:53:01
你好 我挑了大概四十几个单菌落 都是假阳性啊  不知道该咋办...

是不是方法不太对，用infusion做成功率还是挺高的
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即将加入研究生的大军，迷茫！
5楼2014-06-21 10:19:14
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