应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
51/1返回列表
查看: 1391  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chenziping

金虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有2人参与

在构建载体，载体双酶切回收后，做阴性对照，自连接，转化后竟然长了很多菌落
                    同时，又做了酶切后的载体直接转化也是长了菌落
                    是不是酶切不完全，但是，酶切后我做了电泳发现载体是已经酶切了 和原载体电泳产物条带不同啊？？？载体是pGBKT-7,酶切位点是EcoR1，Nco1.为什么啊，请大家指点啊。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-06-20 15:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chenziping(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-20 16:45:04
可能的原因：
1.载体回收时跑的时间有点短，切胶时污染了非载体带。
2.酶切后的载体直接转化长菌落是正常的，但是不会长太多，太多就错了。
3.切下的带有多大？
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-20 15:34:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-21 01:01:30
何必这么折腾，少切点质粒直接连外源片段就得了。记住重点，不必在这里浪费时间。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-20 20:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenziping

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-20 20:11:50
何必这么折腾，少切点质粒直接连外源片段就得了。记住重点，不必在这里浪费时间。

你好 我挑了大概四十几个单菌落 都是假阳性啊  不知道该咋办
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-20 22:53:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Renjingyu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenziping at 2014-06-20 22:53:01
你好 我挑了大概四十几个单菌落 都是假阳性啊  不知道该咋办...

是不是方法不太对，用infusion做成功率还是挺高的
赞一下 回复此楼
即将加入研究生的大军，迷茫！
5楼2014-06-21 10:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chenziping 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 6/300 2026-11-06 09:03 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 9/450 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 20/1000 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:22 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭