| 查看: 3443 | 回复: 2 | ||||
[求助]
用DTNB法测定巯基数目的详细protocol，以GSH作标准曲线 已有1人参与
|
| 近期要用DTNB法测定某蛋白上巯基的数目，用谷胱甘肽做标准曲线，酶标仪测定。求详细的步骤？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有258人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 还原性谷胱甘肽含量的测定
已经有3人回复
- GPx(谷胱甘肽过氧化物酶）活性检测中的疑问
已经有9人回复
- 【求助】谷胱甘肽含量的测定方法
已经有6人回复
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
-
专家经验: +140 - MolEPI: 2
- 应助: 308 (大学生)
- 金币: 1103.5
- 散金: 8294
- 红花: 65
- 沙发: 5
- 帖子: 1996
- 在线: 266.1小时
- 虫号: 3188421
- 注册: 2014-05-07
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuqianabc(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-23 08:27:38
感谢参与，应助指数 +1
zhuqianabc(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-23 08:27:38
|
详细步骤已经上传; http://www.docin.com/p-65138485.html |
2楼2014-06-21 16:14:17
1012203014
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 334.1
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 395
- 在线: 232.6小时
- 虫号: 1349300
- 注册: 2011-07-18
- 性别: GG
- 专业: 化学反应工程
|
测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，样品在412nm处的吸收峰并不是最大的，这样会有影响吗？ 问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法 如能解答，必当重谢！  |
3楼2015-10-07 21:35:28
20