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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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暖阳ny2

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 水煮法提取金黄色葡萄球菌DNAPCR扩增后没有条带 已有2人参与

提取条件为:75℃水煮15min,结果如图片1所示
图片2为试剂盒提取沙门氏菌DNA的PCR结果,两次实验所用的PCR试剂,PCR条件一样,都用的通用引物
各位大神,请问为什么金黄色葡萄球菌能看到DNA的条带,却看不到PCR扩增后的条带呢???急!!!

水煮法提取金黄色葡萄球菌DNAPCR扩增后没有条带
图片1


水煮法提取金黄色葡萄球菌DNAPCR扩增后没有条带-1
图片2
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dllchina

超级版主

有机的微生物大神

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励热心应助! 2014-06-17 21:33:43
P什么,16S rRNA gene? 模板都不一样,有通用引物有没有通用PCR体系,P不出来不是很正常么,你可以降低退火温度,减少引物量,还有你PCR的条带也太淡了吧如果回收技术差点,柱子差点,回收后跑电泳估计都看不到条带。
2楼2014-06-17 20:11:23
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暖阳ny2

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2014-06-17 20:11:23
P什么,16S rRNA gene? 模板都不一样,有通用引物有没有通用PCR体系,P不出来不是很正常么,你可以降低退火温度,减少引物量,还有你PCR的条带也太淡了吧如果回收技术差点,柱子差点,回收后跑电泳估计都看不到条带 ...

是这样的,以往在相同条件下都能扩增,跑出电泳条带,现在不知道为什么就是跑不出来,试剂,方法都没有变,也做了多次重复,的确以往条带要亮一些,会是哪边出问题呢
3楼2014-06-18 16:58:20
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爱骨头的鱼

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你试一试增加模板的量,我之前遇到过类似的问题,试剂盒提取的模板能扩出来,且条带清晰。而煮沸法提取的模板,增加到3-4ul才隐约有条带。
4楼2014-06-18 22:18:37
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dllchina

主管区长

有机的微生物大神

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by 暖阳ny2 at 2014-06-18 16:58:20
是这样的,以往在相同条件下都能扩增,跑出电泳条带,现在不知道为什么就是跑不出来,试剂,方法都没有变,也做了多次重复,的确以往条带要亮一些,会是哪边出问题呢...

你按楼上说的做一下吧
5楼2014-06-19 10:16:06
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暖阳ny2

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱骨头的鱼 at 2014-06-18 22:18:37
你试一试增加模板的量,我之前遇到过类似的问题,试剂盒提取的模板能扩出来,且条带清晰。而煮沸法提取的模板,增加到3-4ul才隐约有条带。

谢谢,下次我试试
6楼2014-06-19 22:28:29
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