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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 水煮法提取金黄色葡萄球菌DNAPCR扩增后没有条带
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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)

[求助] 水煮法提取金黄色葡萄球菌DNAPCR扩增后没有条带 已有2人参与

提取条件为：75℃水煮15min，结果如图片1所示
图片2为试剂盒提取沙门氏菌DNA的PCR结果，两次实验所用的PCR试剂，PCR条件一样，都用的通用引物
各位大神，请问为什么金黄色葡萄球菌能看到DNA的条带，却看不到PCR扩增后的条带呢？？？急!!!

水煮法提取金黄色葡萄球菌DNAPCR扩增后没有条带
图片1


水煮法提取金黄色葡萄球菌DNAPCR扩增后没有条带-1
图片2
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1楼 2014-06-17 16:32:42
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励热心应助！ 2014-06-17 21:33:43
P什么，16S rRNA gene? 模板都不一样，有通用引物有没有通用PCR体系，P不出来不是很正常么，你可以降低退火温度，减少引物量，还有你PCR的条带也太淡了吧如果回收技术差点，柱子差点，回收后跑电泳估计都看不到条带。
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2楼2014-06-17 20:11:23
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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2014-06-17 20:11:23
P什么，16S rRNA gene? 模板都不一样，有通用引物有没有通用PCR体系，P不出来不是很正常么，你可以降低退火温度，减少引物量，还有你PCR的条带也太淡了吧如果回收技术差点，柱子差点，回收后跑电泳估计都看不到条带 ...

是这样的，以往在相同条件下都能扩增，跑出电泳条带，现在不知道为什么就是跑不出来，试剂，方法都没有变，也做了多次重复，的确以往条带要亮一些，会是哪边出问题呢
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3楼2014-06-18 16:58:20
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爱骨头的鱼

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你试一试增加模板的量，我之前遇到过类似的问题，试剂盒提取的模板能扩出来，且条带清晰。而煮沸法提取的模板，增加到3-4ul才隐约有条带。
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4楼2014-06-18 22:18:37
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暖阳ny2 at 2014-06-18 16:58:20
是这样的，以往在相同条件下都能扩增，跑出电泳条带，现在不知道为什么就是跑不出来，试剂，方法都没有变，也做了多次重复，的确以往条带要亮一些，会是哪边出问题呢...

你按楼上说的做一下吧
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5楼2014-06-19 10:16:06
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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱骨头的鱼 at 2014-06-18 22:18:37
你试一试增加模板的量，我之前遇到过类似的问题，试剂盒提取的模板能扩出来，且条带清晰。而煮沸法提取的模板，增加到3-4ul才隐约有条带。

谢谢，下次我试试
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6楼2014-06-19 22:28:29
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