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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 诚心求教！！求金黄色葡萄球菌快速定量的方法！！！有效者重谢！！
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330718070

木虫 (小有名气)

[交流] 诚心求教！！求金黄色葡萄球菌快速定量的方法！！！有效者重谢！！

有没有做过金黄色葡萄球菌检测的大侠，求细菌快速定量的方法
小弟才接触细菌这一块，看到很多检测细菌的文献，但是基本都没有具体指出他们是如何对细菌进行定量的，因为细菌会增殖使其数量发生变化，所以需要每天对细菌进行一个较准确定量才能开始实验，而OD值法只能确定高浓度下的细菌浓度，平板涂布法又太慢，所以向各位大侠急求解决办法~诚心求教，有效者追加重谢！！

[ Last edited by 330718070 on 2012-12-7 at 12:23 ]
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1楼 2012-12-07 12:22:23
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yellowred255

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2012-12-07 16:17:16
amisking: 回帖置顶 2012-12-07 20:37:29
国标不是有吗？？金黄色葡萄球菌不用数数的，只要有就已经不合格了。一般是两个手段同时进行测试，就是血平板和Baird-Parker平板同时进行试验。
金黄色葡萄球菌的检验  样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。  增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。  分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24~48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2~3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。
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3楼2012-12-07 14:58:14
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普通回帖

d3dong

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我仅仅知道平板计数的方法，不过还有一种是用3M纸片法检测，貌似也是可以计数，不过要说快速的计数，这个我确实不知道，基本都要长一天吧！
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2楼2012-12-07 14:26:52
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407031345

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是实验的 新手  但是还是有资料的百度下  百度文库就有相关的资料  只是我不怎么懂
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5楼2012-12-07 16:35:39
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yellowred255 at 2012-12-07 14:58:14
国标不是有吗？？金黄色葡萄球菌不用数数的，只要有就已经不合格了。一般是两个手段同时进行测试，就是血平板和Baird-Parker平板同时进行试验。
金黄色葡萄球菌的检验  样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入2 ...

我是做分析的，我们要做的就是分析样品（食品，环境或者生物样本）中金黄色葡萄球菌的量，也已经有很多分析类的文章检测细菌了，我就是不知道他们是如何准确的把每天实验中的金葡菌量定量的，因为细菌是会增殖的嘛，或者你知道有什么办法是细菌在保持活性的情况下不增殖？这也可以算是一种方法，若能告知并有效，必重谢！
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8楼2012-12-07 18:12:38
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mizhoulong

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
330718070: 金币+8, 谢谢关注，如果你有同学做这个，请帮我问下，重谢~ 2012-12-08 10:36:24
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-11 16:00:43
这个不需要疑问。

1.快速定量基本上都是基于OD值测定的，不过一般的分光光度计检测范围有限，也就是要求高细菌浊度；
2.再就是基于细菌染色镜检的，这个你肯定不想做，很繁琐；
3.咋就是涂平板数菌落数了。

其他的差不多都是基于这几种方法吧。
实验需要的就是耐心，科研基本上就是简单重复大量的劳动罢了。
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9楼2012-12-08 01:01:29
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mizhoulong

木虫 (著名写手)
其他快速检测的原理无非就是这些，至于检测ATP发光的什么的，不太靠谱。

有些快速检测的仪器，但是很昂贵，如果不是专业微生物实验室，不建议购买使用。
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10楼2012-12-08 01:03:20
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by mizhoulong at 2012-12-08 01:01:29
这个不需要疑问。

1.快速定量基本上都是基于OD值测定的，不过一般的分光光度计检测范围有限，也就是要求高细菌浊度；
2.再就是基于细菌染色镜检的，这个你肯定不想做，很繁琐；
3.咋就是涂平板数菌落数了。

...

这个我也知道，我倒不是怕麻烦，只是涂平板太慢了，等它结果出来细菌数目又该变了吧，做分析的要求比较精确一些，我就是很想知道别的同行做这个的时候是怎么解决这个问题的，因为检测细菌的文章也很不少了。
还有我想知道染色镜检快不快？有多麻烦？谢谢！
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11楼2012-12-08 10:38:05
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mizhoulong

木虫 (著名写手)
建议你还是测定菌液OD值最为快捷简便
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12楼2012-12-09 02:57:51
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by mizhoulong at 2012-12-09 02:57:51
建议你还是测定菌液OD值最为快捷简便

可是那个可适用的浓度太高了，测出来对我的实验没有多大的实际意义呀，我们做分析的一般最少要做到10的3次方以下才有意义，否则做出来很难投文章呀
你之前说的染色镜检法很麻烦么？能不能给说说
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13楼2012-12-10 01:01:10
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d3dong

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
330718070: 金币+3, 谢谢回帖，烦请继续关注 2012-12-10 21:09:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by yellowred255 at 2012-12-07 14:58:14
国标不是有吗？？金黄色葡萄球菌不用数数的，只要有就已经不合格了。一般是两个手段同时进行测试，就是血平板和Baird-Parker平板同时进行试验。
金黄色葡萄球菌的检验  样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入2 ...

你这一步只要再继续稀释，就可以进行计数了。
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14楼2012-12-10 08:56:49
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by d3dong at 2012-12-10 08:56:49
你这一步只要再继续稀释，就可以进行计数了。...

我要的不是定性测定，是要定量计数，我求的就是计数方法，不是别的，要是您知道有快速对金葡菌计数的方法，诚请告知，有效者重谢！
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15楼2012-12-10 21:11:38
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mizhoulong

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
330718070: 金币+2, 小木虫只允许我给你10个金币，不然我还想多送点的~~~~~~ 2012-12-11 09:20:13
看你的要求，染色精镜检嫌麻烦，

我做的染色精简，经常要到10E5/mL才能数的好，

除了倒平板，别无他法了。
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16楼2012-12-11 07:23:05
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zhoufeng1982

木虫 (著名写手)
知道了啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊
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17楼2012-12-11 08:47:50
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by mizhoulong at 2012-12-11 07:23:05
看你的要求，染色精镜检嫌麻烦，

我做的染色精简，经常要到10E5/mL才能数的好，

除了倒平板，别无他法了。

你说的10E5/mL是上限还是下限啊？如果是往更低浓度也可以数的话完全没问题啊~染色精镜检如果可以的话我没问题，我不怕麻烦，只是要快
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18楼2012-12-11 09:23:09
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mizhoulong

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
荧光显微镜+DAPI或者live/dead kit

染色镜检，一般好像是1*10E6~5*10E5，具体记不清楚了。因为计算浓度时，光乘以的系数就是10E4
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330718070
21楼2012-12-12 00:20:39
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龙之吻851102

新虫 (小有名气)
★ ★
330718070: 金币+2 2012-12-12 10:22:12
有卖检测试纸的，另外荧光实时定量PCR较快
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22楼2012-12-12 08:19:40
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330718070

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
21楼: Originally posted by mizhoulong at 2012-12-12 00:20:39
荧光显微镜+DAPI或者live/dead kit

染色镜检，一般好像是1*10E6~5*10E5，具体记不清楚了。因为计算浓度时，光乘以的系数就是10E4

一定要荧光显微镜么？我想用革兰氏染色法也可以吧？不知道你做过没，快不快呢？
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23楼2012-12-12 10:21:44
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 龙之吻851102 at 2012-12-12 08:19:40
有卖检测试纸的，另外荧光实时定量PCR较快

请问你说的测试纸叫什么名字？哪里有卖？能告知些具体信息么？
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24楼2012-12-12 10:24:19
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
330718070: 金币+4 2012-12-12 10:57:17
引用回帖:
24楼: Originally posted by 330718070 at 2012-12-12 10:24:19
请问你说的测试纸叫什么名字？哪里有卖？能告知些具体信息么？...

可以用3M的快速检测试纸进行快速检测，不需要配制培养基和倒平板等工作，适用于大批量微生物检测计数。
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25楼2012-12-12 10:42:49
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by xiaojun542 at 2012-12-12 10:42:49
可以用3M的快速检测试纸进行快速检测，不需要配制培养基和倒平板等工作，适用于大批量微生物检测计数。...

请问这种试纸可以计数到哪个数量级？贵不贵？
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26楼2012-12-12 10:57:55
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xiaojun542

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
330718070: 金币+6, 谢谢，很有价值，可以作为一种选择 2012-12-12 16:08:46
引用回帖:
26楼: Originally posted by 330718070 at 2012-12-12 10:57:55
请问这种试纸可以计数到哪个数量级？贵不贵？...

http://solutions.3m.com.cn/wps/p ... /Petrifilm/Catalog/
在这里详细看看。价格不是很贵。
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27楼2012-12-12 12:18:52
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dkyy970111

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
330718070: 金币+2 2012-12-13 16:24:15
可以考虑荧光定量PCR方法（Q-PCR),检测16s rRNA(rDNA)
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28楼2012-12-13 15:25:15
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330718070

木虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by dkyy970111 at 2012-12-13 15:25:15
可以考虑荧光定量PCR方法（Q-PCR),检测16s rRNA(rDNA)

那个仪器价格太高了，老板不会同意的，为个计数花那么多钱，不过还是谢谢你的提议
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29楼2012-12-13 16:24:11
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zl901203

至尊木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by mizhoulong at 2012-12-09 02:57:51
建议你还是测定菌液OD值最为快捷简便

您好，请问知道OD值后怎么才能知道里面具体有多少菌呢？还有金葡菌在平板上一般多长时间能长出肉眼可以数出来的菌落呢？谢谢您~~
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30楼2012-12-29 16:47:27
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mizhoulong

木虫 (著名写手)
上网搜搜吧，我忘了，好像600nm测试，OD=1，大肠杆菌是10的9次方还是多少来着，具体数字我记不清了，因为很少用这种方法了，一上网搜搜，找到具体数字。

如果你要确定金葡菌，最好自己配一定的浓度，自己测试，在OD = 0.1-1之间取6个浓度，建立标准曲线，然后测未知样品。
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32楼2012-12-31 02:24:56
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mizhoulong

木虫 (著名写手)
金葡菌一般16-24小时就行
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33楼2012-12-31 02:25:17
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