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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 在六孔板里转染siRNA，有没有人做过？急。
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DoctorWatson

铜虫 (小有名气)

[求助] 在六孔板里转染siRNA，有没有人做过？急。 已有1人参与

我在网上找的protocol全都不一样，有的人说要接种在无血清、含抗生素的培养基，而有的则说要无抗生素、含血清的培养基。
真无语了。

问几个问题，第一个是分子量约13300的常规siRNA序列，一孔应该需要加多少？

第二个是lipo2000应该加多少？

我找到的pro里：
转染6孔板   1、转染前一天，接种到6孔培养板上。（4*105/ml.）  转染时，细胞要达到90~95%的融合。细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。  2、溶液A：240ul 无血清培养基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well （总体积250 ul）（温育5min）如果D-MEM做为Lipofectamine 2000的稀释液，必须在5分钟内同稀释的DNA混合。   3、溶液B：246 ul 无血清培养基 + 4 ug 质粒 per well（总体积250 ul）（此为推荐剂量）

他这上面说的应该是每一孔的量吧？质粒和siRNA可以通算吗？

接种的培养基，到底是什么样的？
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1楼 2014-06-14 16:16:02
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
DoctorWatson(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-15 21:14:13
去网上找lipo 2000的说明书。
lipo号称可以在有血清的培养基中转染，但是不推荐。
转染前，细胞用含血清含抗生素的培养基培养。转染时，换成无抗生素无血清的培养基培养。用无抗生素无血清的培养基配置转染混合物。4-6小时后，换成含抗生素含血清的培养基。
转DNA时，我们用ug计量，转RNA时，我们用pmol计量。不明白的，翻看高中化学书。
6孔板推荐RNA 100pmol, lipo2000 5ul.
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2楼2014-06-15 17:28:46
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DoctorWatson

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-15 17:28:46
去网上找lipo 2000的说明书。
lipo号称可以在有血清的培养基中转染，但是不推荐。
转染前，细胞用含血清含抗生素的培养基培养。转染时，换成无抗生素无血清的培养基培养。用无抗生素无血清的培养基配置转染混合物 ...

谢谢找到了，1 OD用DEPC150稀释，刚好也是5微升。
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3楼2014-06-26 23:36:18
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