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DoctorWatson铜虫 (小有名气)
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在六孔板里转染siRNA，有没有人做过？急。 已有1人参与
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我在网上找的protocol全都不一样，有的人说要接种在无血清、含抗生素的培养基，而有的则说要无抗生素、含血清的培养基。 真无语了。 问几个问题，第一个是分子量约13300的常规siRNA序列，一孔应该需要加多少？ 第二个是lipo2000应该加多少？ 我找到的pro里： 转染6孔板 1、转染前一天，接种到6孔培养板上。（4*105/ml.） 转染时，细胞要达到90~95%的融合。细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2、溶液A：240ul 无血清培养基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well （总体积250 ul）（温育5min）如果D-MEM做为Lipofectamine 2000的稀释液，必须在5分钟内同稀释的DNA混合。 3、溶液B：246 ul 无血清培养基 + 4 ug 质粒 per well（总体积250 ul）（此为推荐剂量） 他这上面说的应该是每一孔的量吧？质粒和siRNA可以通算吗？ 接种的培养基，到底是什么样的？ |
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 分子生化实验经验积累 |
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2楼2014-06-15 17:28:46
DoctorWatson
铜虫 (小有名气)
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